自噬是维持细胞内环境稳定的重要机制,是细胞在营养缺乏通过自我消化蛋白质和细胞器循环利用能量以维持稳态平衡的过程。自噬相关基因功能缺失突变可导致自发性瘤子,因此自噬失调被认为是病症发展的重要机制之一。肺病是发病率和死亡率增长较快,对人群健康和生命威胁较大的恶性瘤子之一。其中,非小细胞肺病(NSCLC)是较常见的肺病类型,占所有肺病的80%。大多数NSCLC细胞的表皮生长因子受体(EGFR)的酪氨酸激酶结构域中存在特异性唤醒突变。在NSCLC中,唤醒的EGFR通过酪氨酸磷酸化的自噬基因6(BECN1)阻止自噬而促进瘤子进展。饥饿等也可诱导自噬的发生,通过降解大分子物质和细胞器为细胞活动提供营养和能量。江苏western blot检测自噬
关于自噬的检测,虽然Autophagy每几年就发一个指南,但各种检测方法众说纷纭,所以目前倾向于多证据支持的结果。形态学自然是电镜看到自噬泡,但电镜毕竟是瞬时状态的捕捉,个人认为对于自噬这种动态持续性过程的检测比较鸡肋。还有一个常用的就是GFP-LC3转染,现在有了更好的RFP-GFP-LC3双标,目的是为了区分自噬体和自噬溶酶体(因为酸性环境会使绿荧光猝灭,具体原理不详说了),这样可以观察到自噬潮,还是比较靠谱的方法。下来就是经典的LC3,它可是自噬泡必不可少的部分,自然被用来检测自噬,LC3分I和II,其实是一种翻译后修饰过程,I与磷脂酰丝氨酸结合就成了II,自噬时游离型I与PE结合成为膜型的II,因此检测LC3的表达也是说明自噬的方法,但指南建议要与自噬阻止剂联合,也就是设几个对照,检测到自噬流。以前还有人用MDC,丫腚橙(好像不是这么写的)去染自噬泡,但特异性不高比较少用了。再就是自噬基因ATG的检测。个人觉得想说明自噬发生不难,但说清楚说明白就比较难了。台州细胞自噬自噬既能阻止也能促进细胞凋亡,两种反应在生物体内普遍存在。
溶酶体的作用还包括对细胞内物质的消化,溶酶体能消化分解经胞吞作用摄入细胞内的各种物质和细胞内衰亡或损伤的各种细胞器等。吞噬性溶酶体内的各种大分子在水解酶的作用下,可被分解为简单物质。例如,能将蛋白质分解为二肽或游离氨基酸;把核酸分解为核苷和磷酸;使碳水化合物分解为寡糖类或单糖;将中性脂肪分解为甘油和脂肪酸等。这些被分解而生成的可溶性小分子物质,能透过溶酶体体膜进入细胞质基质,重新参与细胞的物质代谢,一些未被完全消化的物质残留下来,形成残余小体。
自噬与凋亡合作方式在现有研究报道中较为多见。该种情况下,自噬与凋亡的调控目标都是促进细胞死亡。各自同步引发细胞死亡;(2)一种为主,另一为辅;(3)一方功能缺陷情况下,另一方替补诱导细胞死亡。比较多诱导凋亡的刺激常常也会诱导自噬,比如神经酰胺诊治乳腺病和结肠病中均发现凋亡与自噬同时上调。在As2O3诊治T淋巴细胞的临床试验中也发现二者被同时唤醒,抵抗细菌药物氯碘喹啉通过扰乱mTOR信号通路诱导白血病细胞和骨髓瘤细胞发生自噬性死亡和凋亡;靶向敲除自噬相关蛋白ATG7或用自噬阻止剂3-甲基腺嘌呤会阻止caspase唤醒,减少细胞凋亡;比较多情况下,自噬诱导细胞死亡的潜力被凋亡所阻止,但它会在凋亡功能缺陷时发挥关键作用。依托泊苷、毒胡萝卜内酯等处理的凋亡缺陷Bax/Bak61/61的小鼠胚胎成纤维细胞中发现细胞自噬上调,特异性阻止剂阻止自噬后细胞存活率明显上调。上述情况下,自噬和凋亡通过共同作用、互补合作,或替补机制共同引发细胞死亡。自噬是细胞蛋白降解的机制之一。
自噬与瘤子的关系可能是双重的:对不同的细胞,自噬的作用可能不同。相同的细胞在不同的外部因素作用时,自噬的作用可能不同。在瘤子发生了发展的不同阶段,自噬的作用可能不同。瘤子生长的早期阶段自噬增强,是由于此时瘤子的血管化作用不足,病细胞的营养供给有限,需要通过自噬为自身提供营养。瘤子进入发展阶段后基因变异积累,使包括Beclin1在内的众多抑病基因失活,自噬活力降低。对单个细胞和对整个瘤子阻滞的作用可能不同。自噬功能不全的细胞易于坏死,但是坏死组织产生的细胞因子(包括部分生长因子)反而会促进瘤子的生长。自噬可以被描述为细胞质内的成分被双层膜的囊泡包裹,形成自噬体,进而传递到溶酶体进行降解的过程。苏州wb检测自噬
自噬和细胞周期调控都是极其动态的基本生物学过程,而自噬在细胞周期调控中的功能与分子机制还不清楚。江苏western blot检测自噬
自噬的过程:1、细胞接受自噬诱导信号后,在胞浆的某处形成一个小的类似“脂质体”样的膜结构,然后不断扩张,被称为Phagophore。2、Phagophore不断延伸,将胞浆中的任何成分,全部揽入,然后“收口”,成为密闭的球状的autophagosome,即“自噬体”。3、自噬体形成后,可与细胞内吞的吞噬泡、吞饮泡和内体融合(这种情况不是必然要发生的)。4、自噬体与溶酶体融合形成autolysosome,期间自噬体的内膜被溶酶体酶降解,2者的内容物合为一体,自噬体中的“货物”也被降解,产物(氨基酸、脂肪酸等)被输送到胞浆中供细胞重新利用,而残渣或被排出细胞外或滞留在胞浆中。江苏western blot检测自噬
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