—20℃）冻存——应选较佳稀度冻存。③若工作浓度大于1∶500则要先将原液稀释十倍，而后分装10μl/瓶→冻存（-20℃）于冰箱备用。④关于Ab保存应参照说明书。（3）Ab浓度的选择Ab浓度不可太高或太低，因为Ag-Ab结合需在一定浓度范围内进行，若一方过剩则形成复合物小且少；极过剩时已形成的复合物亦会解体而呈现假阴性。——并非Ab浓度越高越好。3．Ab滴片技术——所滴的抗体应与切片上的组织刚好吻合。[注意]滴抗体前需把切片上的水弄干，但不能干片。要领：甩净组织周围的水。4．PBS洗涤技术（1）洗涤的目的①保证离子浓度和PH值。②减少非特异反应（平时Ab不可靠很纯）（2）方法：洗三次，每次5分钟。5．Ab孵育技术（1）必须在湿盒内进行，以防抗体的蒸发和干片。（2）温度与时间4℃：过夜；37℃：2hor参考说明书6．光镜控制显色方法（1）室内操作：注意温度与时间的关系，室温较宜5分钟。（2）染色稍浅亦可拿出，脱水，封片后颜色可加深。对照组和染色结果的评价从以下几个方面综合评价：1．阳性染色特点①Ag定位，胞浆、胞核、胞膜、间质具有结构性。（非特异性～细胞与组织无区别）②染色强度不同：颜色深浅不一。免疫组化检测服务找融享生物。山东免疫组化机构哪家好
免疫组化可以辅助病理诊断、指导、评估预后，所以在做免疫组化过程中的质控问题处理尤其重要。免疫组化技术是利用已知的特异性抗体或抗原特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂通过借助显微镜的观察，从而在抗原抗体结合部位确定组织细胞结构的一门组化技术。在病理诊断、基础医学研究工作中免疫组化技术已成为非常重要的手段。随着免疫组化试剂新种类不断出现及方法的改进，特别是即用型试剂盒的出现，使抗体的标记更加简便、快捷，更加规范化，标准化的实验操作是必不可少的。免疫组化标准化染色技术是一项实验性很强的技术，任何一个环节出现问题，都可以直接影响免疫组化结果山东免疫组化机构哪家好融享生物为您提供一个专业的技术服务，吊炸天的免疫组化。
非特异性染色弥散性均匀）2．组织切片制作过程的影响①固定不良—非特异性染色，显示不均。②边缘干燥—非特异性染色（常见），加抗体时勿干片。3．人工假象与特异性结果显示不在同一平面上。阳性对照：用已知抗原阳性的切片与待检标本同时进行免疫细胞化学染色。对照切片呈阳性结果，标为阳性对照。阴性对照：用确证不含已知抗原的标本作对照，应呈阴性结果，称阴性对照。其实这只是阴性对照中的一种，阴性对照还应包括空白、替代、吸收和***实验。▲染色失败的几种原因：（1）所染的全部切片均为阴性结果，包括阳性对照在内。全部（－）原因可能：①染色未完全严格按照操作步骤进行；②漏加一种抗体，或抗体失效；③缓冲液内含叠氮化钠，***了酶的活性；④底物中所加H2O2量少或失效；⑤复染或脱水剂使用不当（2）所有切片均呈阳性反应，原因可能是：①切片在染色过程中抗体过浓，或干燥了。②缓冲液配置中未加氯化钠和PH值不准确，洗涤不彻底。③使用已变色的呈色底物溶液，或呈色反应时间过长。④抗体温育的时间过长。⑤H2O2浓度过高，呈色速度过快。粘附剂太厚。（3）所有切片背景过深，原因可能是：①未加酶消化处理切片。②切片或涂片过厚。③漂洗不够。
免疫组织化学（Immunohistochemistry）又称 免疫细胞化学。它是 组织化学的分支，它是用标记的 特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测技术。 中文名 免疫组化技术 外文名 Immunohistochemistry 又 称 免疫细胞化学 属 于 组织化学 目录 1 前言 ▪ 发展介绍 ▪ 技术分类 ▪ 标记物 ▪ 应用 2 免疫组织化学 免疫组化技术前言 编辑 免疫组化技术发展介绍 ——1941年 Coons 首先用 荧光素 标记抗体—检测肺组织内的肺炎双球菌获得成功。 —— 60年代 Nakane建立酶标抗体技术——铁蛋白标记Ab技术。 —— 70年代 Stemberger 改良上述技术，建立 辣根过氧化物酶——抗体过氧化物酶（PAP）技术，使免疫细 胞化学得到广泛应用。 —— 80年代 Hsu 等建立了抗生物素—生素（ABC）法之后，免疫金—银染色法、半抗原标记法、 免疫电镜 技术相继问世。 上海融享生物免疫朱短周期，服务优。
物质所具有的抗原性主要由分布在抗原表面的抗原决定簇决定。固定液的固定对免疫组化的正确结果极其重要，此液能使抗原保存良好。抗原修复的好坏直接影响着免疫组化检测结果的可靠性。在进行免疫组化时并非所有的抗原都要进行抗原修复，抗原性保存良好或基本保存者不需要修复。目前抗原修复的方法主要有蛋白酶消化法、硼氢化钠（NaBH4）修复法和热修复法。较常用的是热修复法，尤其是细胞核抗原经热修复后，其染色效果特别好。所以我们必须清楚影响抗原性的因素及各种抗原修复的方法，严格按照抗体说明书进行抗原修复。鉴于抗原修复时间的方法较多，在实际工作中，究竟选用何种抗原修复法，应根据抗原抗体种类予以选择，必要时可以多种方法同时使用，这样使其更具有针对性，标记结果更理想。免疫组化哪里好就找融享生物。山东免疫组化机构哪家好
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DAB显色
背景的深浅和特异性染色的深浅均可以由DAB孵育条件决定。DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现特异性染色较强而本底着色较浅时即可冲洗；DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间；此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间；DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现阳性染色，一方面可能说明你的抗体浓度过低或孵育时间过短（比较好一抗4℃过夜）；另一方面就是封闭时间过长。
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