自噬基本参数
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自噬企业商机

自噬与疾病:1、自噬与代谢:自噬能清理不正常构型的蛋白质,并消化受损和多余的细胞器,是真核细胞中普遍存在的降解/再循环系统。在细胞新陈代谢、结构重建、生长发育中起着重要作用。在饥饿和新生儿早期,自噬作用明显加强,自噬体明显增多。2、自噬与肿细胞:细胞自噬与细胞的关系十分复杂,目前尚未完全阐明。一方面,正常细胞自噬增强,可表现出阻止肿细胞发生的功能;与此相反,阻止细胞自噬有潜在的致瘤可能。另一方面,肿细胞也可通过增强细胞自噬来对抗由缺氧、代谢产物、诊治药物诱导的应激反应。正常细胞自噬增强,可表现出阻止**发生的功能。北京自噬荧光

自噬(Autophagy),即细胞“吃掉自己”的过程,是一种细胞自我降解和循环利用胞内组分的过程。常见的自噬过程有三种类型:巨自噬、微自噬和分子伴侣介导的自噬。在现代的生物学中,“自噬”的概念是由比利时生物化学家克里斯汀·德·迪夫(ChristiandeDuve)在研究溶酶体功能时首先提出的。尽管克里斯汀·德·迪夫因发现和阐明溶酶体的功能获得了1974年诺贝尔生理和医学奖,细胞自噬的具体机理直到20世纪90年代才由日本生物学家大隅良典(YoshinoriOhsumi)阐明。大隅良典也因对细胞自噬的研究获得了2016年诺贝尔生理和医学奖。mRFP-GFP-LC3双荧光自噬正常细胞中的自噬性溶酶体在消化、分解、自然更替一些细胞内的结构上起着重要作用。

由于自体吞噬较少受到关注,而且比较难在体外实验条件下实现,因此,对自体吞噬的机制还不是比较了解。研究主要集中在酵母及其它重要的单细胞真核生物,而对植物和哺乳动物细胞中的自体吞噬过程的了解则更少。尽管对自体吞噬具体过程的了解还需要较大加强,但是人们已经勾勒出自体吞噬过程的大致轮廓:细胞质中的线粒体等细胞器首先被称为“隔离膜”的囊泡所包被,这种“隔离膜”主要来自于内质网和高尔基体;囊泡较终形成双层膜结构,即自吞噬体,也称之为初始自体吞噬泡;自吞噬体与胞内体融合形成中间自体吞噬泡;较终自体吞噬泡的外膜与溶酶体融合形成降解自体吞噬泡,由溶酶体内的酶降解自体吞噬泡中的内容物和内膜。在整个自体吞噬过程中,细胞质和细胞器都受到破坏,较明显的是线粒体和内质网受损。虽然自体吞噬并不直接破坏细胞膜和细胞核,但是有证据表明,在较初断裂或消化后,细胞膜和细胞核会较终变成溶酶体以消化和分解自身。

细胞自噬常用的检测方法:1.LC3turnover实验,单检测LC3-II的静态水平并不能够完全反映细胞内的自噬潮变化,需要联合自噬后期阻止剂如溶酶体阻止剂BafilomycinA1或CQ,来比较LC3-II在阻止剂加入前后的变化差异。2.绿色萤光蛋白(GFP)的抗降解性,通过检测转染了GFP-LC3的细胞所产生的GFP片段来评判细胞内自噬水平的变化。3.以p62蛋白作为自噬活性指标,经常被科研人员用作自噬水平升高的辅助检测手段,然而需联合其他检测手段进行证实。4.mRFP-GFP-LC3双萤光活细胞成像,实时动态监测自噬过程,并且能够通过颜色变化确定自噬潮水平的高低。5.使用电子显微镜,然而对实验设备和实验者的技能与辨别能力要求较高,有学者推荐进行双盲实验来定量细胞中自噬体或自噬溶酶体数量。6.流式细胞术,可以检测各个细胞时相的自噬水平,还可以直接计算出萤光强度和阳性细胞百分比,然而在细胞在染色之前,需要使用去垢剂预处理细胞质中的LC3-I。自噬和细胞周期调控都是极其动态的基本生物学过程,而自噬在细胞周期调控中的功能与分子机制还不清楚。

对不同的细胞,自噬的作用可能不同。相同的细胞在不同的外部因素作用时,自噬的作用可能不同。在病变发生的发展的不同阶段,自噬的作用可能不同。病变生长的早期阶段自噬增强,是由于此时病变的血管化作用不足,病细胞的营养供给有限,需要通过自噬为自身提供营养。病变进入发展阶段后基因变异积累,使包括Beclin1在内的众多抑病基因失活,自噬活力降低。对单个细胞和对整个病变阻滞的作用可能不同。自噬功能不全的细胞易于坏死,但是坏死组织产生的细胞因子(包括部分生长因子)反而会促进病变的生长。大自噬:由内质网来源的膜包绕待降解物形成自噬体,然后与溶酶体融合并降解其内容物。成都细胞自噬LC3

自噬信号通路受到严密调控,在基础水平上起到重要管家作用,可使细胞在多种应力条件下继续存活。北京自噬荧光

与凋亡(在**细胞中一般都存在缺限)不同,自噬是被优先保留的。无论是**细胞还是正常细胞,保持一种基础、低水平的自噬活性是至关重要的。因为细胞中随时产生的「垃圾」(破损或衰老的细胞器、长寿命蛋白质、错误合成或折叠错误的蛋白质等等)都需要及时清理,而这主要靠自噬来完成,因此,自噬具有维持细胞自稳的功能;如果将自噬相关基因突变失活,如神经元会发生大量聚集蛋白,并出现神经元退化。同时,自噬的产物,如氨基酸、脂肪酸等小分子物质又可为细胞提供一定的能量和合成底物,可以说,自噬就是一个备用仓库。北京自噬荧光

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