什么是核酸提取技术:核酸在生物体内通常与蛋白质结合存在,核酸提取就是根据核酸和其他细胞组分理化性质的差别,将核酸从细胞中分离并纯化出来的过程。1869年,瑞士医生 Friedrich Miescher首先从白细胞的细胞核中分离出一种称为“核素” 的化学物质。随后,研究者在提取材料和方法上不断进行改进,发展出一系列核酸提取技术。(1)传统的核酸提取方法:使用无机或有机化合物裂解细胞、释放核酸,在应用层析、萃取、硅胶膜吸附等方法沉淀核酸,传统的核酸提取方法操作步骤复杂、效率低,得到的核酸纯度不高,使用的有机溶剂也可能会对操作人员造成伤害。(2)自动化核酸提取:自从1980年一台临床研究自动化样本处理装置被投人使用以来,其快速、准确和重复可靠性强的工作能力较大提高了实验室工作效率,带来强大的高通量样本处理能力。同时也催生了实验室自动化的市场需求,带动了核酸提取技术的发展,国内实验室自动化系统研究相对来说起步较晚,但是经过多年的发展,国内自动化核酸提取领域已初具规模。核酸分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)两大类。南京核算提取试剂盒直销
如果基因组DNA的特性占优势,则纯化时以DNA的形式被保留下来,导致蛋白质的残留;如果蛋白质的特性占优势,则纯化时以蛋白质的形式被去除,导致DNA的损失。有些样品,如肌肉,即使是RNA抽提,也强烈建议使用含蛋白酶的裂解液(或者在操作中的某个时候使用蛋白酶消化蛋白质),原因在于这些样品中的蛋白质,是非常难以去除的。该方法是获得大得率和高纯度的基础。不使用蛋白酶的去污剂裂解方法,仍然在细胞基因组DNA抽提方面有优势,尤其是当得率和纯度要求不是*高,而经济性及操作简单很重要时。控制好裂解液/样品的比例是该方法成功的关键。上海全血核酸提取销售公司密度梯度离心法:密度梯度离心也用于核酸的分离和分析。
核酸的基础知识:核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),其中RNA又可以根据功能的不同分为核糖体RNA(rRNA),信使RNA(mRNA)和转移RNA(tRNA)。DNA主要集中在细胞核内,线粒体和叶绿体中,而RNA主要分布在细胞质当中。核酸中因为嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键,所以核酸具有紫外吸收的特性,DNA钠盐的紫外吸收在260nm附近,其吸光率以A260表示,在230nm处于吸收低谷,因此可以使用紫外分光光度计对核酸进行定量及定性测定。核酸为两性电解质,相当于多元酸,可以使用中性或偏碱性的缓冲液使核酸解离成阴离子,置于电场中向阳极运动,这就是电泳的原理。
磁珠法核酸提取仪的基本原理:抽吸法,也叫移液法,是通过固定磁珠、转移液体来实现核酸的提取,一般通过操作系统控制机械臂来实现转移。提取过程如下:1) 裂解:在样品中加入裂解液,通过机械运动及加热实现反应液的混匀及充分反应,细胞裂解,释放核酸。2) 吸附:在样品裂解液中加入磁珠,充分混匀,利用磁珠在高盐低PH值下对核酸具有很强亲和力的特点,吸附核酸,在外加磁场作用下,磁珠与溶液分离,利用吸头将液体移出弃至废液槽,吸头弃掉。3) 洗涤:撤去外加磁场,换用新吸头加入洗涤缓冲液,充分混匀,去除杂质,在外加磁场作用下,将液体移出。核酸提取在有机相中主要是脂类物质,蛋白质位于两相之间。
密度梯度离心法:密度梯度离心也用于核酸的分离和分析。双链DNA、单链DNA、RNA 和蛋白质具有不同的密度,因而可经密度梯度离心形式形成不同密度的纯样品区带, 该法适用于大量核酸样本的制备,其中氯化铯2溴化乙锭梯度平衡离心法被认为是纯化大量质粒DNA 的选择方法。氯化铯是核酸密度梯度离心的标准介质,梯度液中的溴化乙锭与核酸结合,离心后形成的核酸区带经紫外灯照射,产生荧光而被检测,用注射针头穿刺回收后,通过透析或乙醇沉淀除去氯化铯而获得纯化的核酸。把吸附在特异载体上的核酸用洗脱液洗脱下来,分离得到纯化的核酸。深圳自动核算提取试剂盒销售厂家
核酸提取仪需要注意的事项:进风口和排风口均位于仪器背面。南京核算提取试剂盒直销
磁珠法核酸提取的优势:磁珠法DNA提取是纳米科技与生物技术的完美结合,具有其它DNA提取方法不可比拟的优势:1.样本需求量低:微量的材料即可提到高浓度的核酸;2.操作简单快速:整个操作流程基本分为五步(裂解、结合、洗涤、干燥、洗脱),全程无需离心操作,大多可在30~60分钟内完成;3.质量稳定可靠:游离的磁珠与核酸的结合量更大,特异性的结合使得核酸纯度更高,且可通过控制磁珠表面基团来调节核酸回收量;4.全自动化操作:采用核酸提取仪可实现自动化、高通量操作,一键启动,即可实现几十甚至几百个样品的提取;5.安全无毒无害:试剂不含酚、氯仿等有毒化学试剂,完全符合现代化环保理念。南京核算提取试剂盒直销