“一步法”核酸免提取:随着临床分子诊断的发展,在某些传染病筛查领域,对于操作时间和检测通量提出了新的要求,亟需一种简单、快速的样本处理技术。圣湘生物为解决这类临床需求,开发了国际靠前的一代一步法样本核酸释放技术,只需在样本中直接加入一种高效的核酸释放剂,可快速破坏细胞或病原体外壳蛋白结构,释放出样本中的核酸,再配以高效的PCR扩增试剂,即可实现快速的分子检测。由此可见,一步法技术平台是一个体系,是核酸释放和扩增的整体搭配。借助一步法技术平台,利用特殊的核酸释放剂,在常温下快速裂解病原体释放核酸,减少生物安全危害,无需煮沸和换管,通过简单操作即可实现核酸快速释放,整个样本处理流程耗时非常短,比柱提取及磁珠法提取技术大幅节约了操作时间,更易普及,直接处理后进行扩增检测,从而实现简单快速、高通量的技术突破。核酸提取仪严格控制孔间污染及批次间污染,杜绝交叉污染。青岛全血核算提取试剂盒直销厂家
什么是核酸:由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的好基本物质之一。核酸较广存在于所有动植物细胞、微生物内、生物体内的核酸常与蛋白质结合形成白。不同的核酸,其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。根据化学组成不同,核酸可分为核糖核酸(简称RNA)和脱氧核糖核酸(简称DNA)。DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。提取核酸的方法及其优缺点:1.保证核酸一级结构的完整性。2.排除其它分子的污染。核酸提取应注意的问题:1.简化步骤,缩短提取时间2.减少化学因素对核酸的降解3.减少物理因素对核酸的降解:机械剪切力和高温4.防止核酸的生物降解。青岛核算提取试剂盒销售厂家核酸提取方法已经成为了 RNA 抽提的主流。
详解磁珠法核酸提取过程中的常见误区:某一种磁珠好,就应该在所有试验中效果都好:磁珠的种类是多种多样的,粒径大小不同,分散性不同,磁响应时间不同,包被基础基质不同,外层修饰官能团不同,包被密度不同,官能团臂长不同,会导致磁珠特性千差万别。所以不同磁珠所适应的实验和体系也是不同的。就像同样是核酸提取的试剂,配方也并不完全相同,同样应用于核酸提取的磁珠,性质也并非完全一致。有的磁珠在常量核酸提取中表现出了更高的吸附效率,有的磁珠更适用于微量核酸提取。有的磁珠适合偏酸性系列的试剂体系,有的磁珠适合偏碱性系列的试剂体系。有的磁珠磁响应性好但是沉降速度快,更适合磁棒式自动提取仪;有的磁珠沉降速度慢但是磁响应时间长,更适合移液式自动提取仪。
根据提取原理不同划分:①采用离心柱法的仪器离心柱法核酸提取仪主要采用离心机和自动移液装置相结合的方法,通量一般在1-12个样本,操作时间和手工提取差不多,并不能提高实际工作效率,且价格昂贵,不同型号仪器的耗材也不能通用,*适合经费充足的大型实验室使用。② 采用磁珠法的仪器以磁珠为载体,利用磁珠在高盐低PH值下吸附核酸,在低盐高PH值下与核酸分离的原理,再通过移动磁珠或转移液体来实现核酸的整个提取纯化过程。由于其原理的独特性,所以可设计成很多种通量,既可以单管提取,较大提高了实验效率,且成本低廉,因而可以在不同实验室使用,是目前市场上的主流仪器。搭配不同种类的磁珠核酸试剂组,可以快速提取动植物组织、血液、体液、刑事检体等样品中的DNA和RNA。磁珠分离技术是一种简单高效的核酸提纯方法。
核酸分离与纯化的步骤:酶作用:主要是通过加入溶菌酶或蛋白酶(蛋白酶K、植物蛋白酶或链酶蛋白酶) 以使细胞破裂,核酸释放。蛋白酶还能降解与核酸结合的蛋白质,促进核酸的分离。其中溶菌酶能催化细菌细胞壁的蛋白多糖N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸残基间的β-(1 ,4) 键水解。蛋白酶K能催化水解多种多肽键,其在65 ℃及有EDTA、尿素(1~4mol/ L) 和去污剂(0. 5 %SDS 或 1 %Triton X-100) 存在时仍保留酶活性,这有利于提高对高分子量核酸的提取效率。在实际工作中,酶作用、机械作用、化学作用经常联合使用。具体选择哪种或哪几种方法可根据细胞类型、待分离的核酸类型及后续实验目的来确定。核酸提取在水相中主要溶解以DNA为主的核酸成分。济南自动核酸提取批发厂家
磁珠法核酸提取纯化原理运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰。青岛全血核算提取试剂盒直销厂家
核酸提取纯化方法:1、层析柱法:通过特殊硅基质吸附材料,能够特定吸附DNA,而RNA和蛋白质顺利通过,然后利用高盐低PH结合核酸,低盐高PH值洗脱,来分离纯化核酸。2、热裂解碱法:碱法提取主要是利用共价闭合环状质粒与线性染色质在拓扑学上的差异来分离他们,在碱性下,变性蛋白是可溶的。3、煮沸裂解法:加热处理DNA溶液,利用线性DNA分子的特性,通过离心将DNA段与变性蛋白质和细胞碎片形成的沉淀分离。4、纳米磁珠法:运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后,制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。利用氧化硅纳米微球的超顺磁性,在Chaotropic盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下,从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出DNA和RNA。青岛全血核算提取试剂盒直销厂家