相比之下,VeraCode GoldenGate甲基化分析技术更适合中通量的筛选及验证研究,它以以矩阵微珠芯片(Sentrix Array Matrix(SAM))形式分析48至384个用户指定的CpG位点。首先,将亚硫酸氢盐处理的基因组DNA 与分析oligo混合,oligo与未甲基化位点的U互补,或者与甲基化位点的C互补。杂交之后,引物延伸,并连接上位点特异的oligo来产生通用 PCR的模板。***,用标记的PCR引物生成可检测的产物。据Illumina的产品**介绍,其产品的**优势在于单个CpG位点的分辨率。其它分析将甲基化定位在一段区域,而通过Illumina分析,你能精确测定某个CpG位点的甲基化水平。DNA异常甲基化与疾病的发生、发展有着密切的联系。辽宁焦磷酸测序技术服务共同合作
DNA甲基化作为表观遗传学研究的重要范畴,已经越来越受到研究者的关注。近些年来,随着DNA甲基化与组蛋白甲基化的联合作用机制、RNA干扰机制及去甲基化机制的发现,使得DNA甲基化研究受到***关注,从医学领域扩展到动植物研究当中,同时在研究方法上也取得了很大的突破。现在用于DNA甲基化检测的方法大概有十多种,从应用上来分,大致可以分成两类:全基因组甲基化分析及特异位点甲基化检测。下面,我们就这两大类检测技术进行分析比较,以便于在实际的科研工作中进行选择。山东Chip-seq技术服务云生物提供DNA甲基化和羟甲基化的表观实验和信息分析技术服务。
Chip-Seq 是指通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP)特异性地富集目的蛋白结合的DN**段,并对其进行纯化和文库构建;然后对富集得到的DN**段进行高通量测序,通过将获得的数百万条序列标签精确定位到基因组上,从而获得全基因组范围内与组蛋白、转录因子等互作的 DNA 区段信息,是目前在全基因组水平研究蛋白结合靶DNA序列的重要手段,为转录因子、组蛋白修饰、核小体定位等表观遗传学的研究提供有效方法。
应用领域
1、确定组蛋白修饰的位置及其与基因表达的关系。
2、完成对转录因子及其它蛋白在基因组上结合位点的精细定位。
3、研究特定的核小体或组蛋白的分布。
荧光定量法(Methylight)
这种技术是在MSP技术上发展起来的,在MSP扩增过程中利用荧光染料进行定量。TaqMan? 探针法的应用使得该技术具有更高的精确性。其原理与SNP检测类似,针对亚硫酸氢盐处理之后的DN**段,在甲基化位点上会存在单碱基的差异,根据这种差异进行探针设计,随后进行实时定量PCR,就能够检测甲基化的差异。这种方法**的优势在于其高敏感性和较高通量,且无需在PCR后电泳、杂交等操作,减少了污染和操作误差。但是TaqMan? 探针订购费用较高,适用于少数位点大量样本筛选。 甲基化验证是甲基化研究必不可少的一环。
DNA甲基化是在DNA甲基化转移酶(Dnmt)的作用下将甲基选择性地添加到胞嘧啶上形成5-胞嘧啶的过程,刚被发现时被定义为第五种碱基,实际上它是一种重要的表观遗传学标记,在调控基因表达、维持染色质结构、基因印记、X染色体失活以及胚胎发育等生物学过程中发挥着重大的作用,它就像魔术师手中一顶**神奇的“帽子”,带给世人层出不穷的惊喜。DNA甲基化的发生、保持和去除都处在生物体精细的调控中,一旦发生紊乱,对于动物而言将导致胚胎死亡或者**等重大疾病,对于植物而言将会出现各种的表型缺陷,那么这顶神奇的“帽子”是如何发挥它神奇功用的呢?这个问题成为整个生物界**热的研究焦点之一。研究者们从DNA甲基化的发生机制,保持机制到去甲基化机制,从基因组甲基化状况研究到特异位点甲基化状况研究,从**初CpG位点的研究到non-CpG位点的研究,从高甲基化研究到低甲基化、未甲基化研究,以及与其密切相关的羟甲基化也慢慢进入人们的视野,***多角度解析DNA甲基化。在Nature、Science、Cell等**杂志上经常能看到它熟悉的身影,说它是生物学研究的“宠儿”一点都不为过。正所谓“工欲善其事,必先利其器”。 甲基化验证方案是TBS。北京ATAC技术服务方案
RRBS用于人、哺乳动物及鱼类方向的高水平甲基化研究。辽宁焦磷酸测序技术服务共同合作
6mAIP-Seq送样要求一、送样类型基因组DNA、动植物组织(包含藻类等)二、保存方式基因组DNA、动植物组织(包含藻类):放-20℃冰箱中保存,或者放-80℃冰箱中长期保存(1年以内);保存期间避免反复冻融。三、运输条件1、基因组DNA:冰袋或者干冰运输;2、植物组织(包含藻类):干冰运输,顺丰陆运(3-4天时间),夏季10-15公斤干冰;秋冬季10公斤干冰;四、样本量要求1、基因组DNA:不少于6ug1)提供样本DNA完整性质检结果,例如琼脂糖凝胶电泳或者Agilent2100电泳等;2)提取基因组DNA,要加RNA酶,去除RNA污染;3)提取基因组DNA,溶到TE或者elutionbuffer,避免溶解到纯水;样本体积不超过100ul;4)提供Qubit检测浓度,基于OD值的检测方法,例如NanoDrop,会严重高估浓度。2、植物组织(包含藻类):1g以上;植物组织,不同组织,送样量不同植物组织:从植物体上,取下新鲜组织,用清水将材料表面的灰尘或泥土冲洗干净,吸干;取不少于1g叶片等组织,对于果实等含糖很高的组织,送样前需要咨询技术人员。3、动物组织:30mg以上用预冷的1×PBS溶液洗掉组织表面残留的血液;取不少于30mg(1/2绿豆大小)组织块,放置-20℃冰箱中保存,或者放-80℃冰箱中长期保存(1年以内)。 辽宁焦磷酸测序技术服务共同合作