核酸提取纯化原则和要求1.保证核酸一级结构的完整性2.排除其它分子的污染（如提取DNA时排除RNA的干扰）3.核酸样品中不应存在对酶有压抑作用的有机溶剂和高浓度的金属离子4.尽可能降低蛋白质、多糖和脂类等大分子物质核酸提取纯化方法酚/氯仿抽提法1956年发明，通过酚/氯仿处理细胞破碎液或者组织匀浆后，在水相中主要溶解以DNA为主的核酸成分，在有机相中主要是脂类物质，蛋白质位于两相之间。醇沉淀法乙醇能够消除核酸的水化层，使带负电荷的磷酸基团暴露出来，NA﹢等带正电荷离子能与磷酸基团结合，形成沉淀。核酸提取纯化原则和要求：核酸样品中不应存在对酶有克制作用的有机溶剂和高浓度的金属离子。重庆核酸提取生产公司
核酸的分离与纯化:核酸的高电荷磷酸骨架使其比蛋白质、多糖、脂肪等其他生物大分子物质更具亲水性,根据它们理化性质的差异,用选择性沉淀、层析、密度梯度离心等方法可将核酸分离、纯化。(1) 酚提取/ 沉淀法:核酸分离的一个经典方法是酚∶氯仿抽提法。细胞裂解后离心分离含核酸的水相,加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25 ∶24 ∶1 体积) 混合液。依据应用目的,两相经漩涡振荡混匀(适用于分离小分子量核酸) 或简单颠倒混匀(适用于分离高分子量核酸) 后离心分离。疏水性的蛋白质被分配至有机相,核酸则被留于上层水相。酚是一种有机溶剂,预先要用STE 缓冲液饱和,因未饱和的酚会吸收水相而带走一部分核酸。苏州全血核算提取试剂盒厂家核酸提取仪需要注意的事项：避免灰尘或纤维在进风口聚集。
洗涤步骤：1.洗涤对于整个提取步骤至关重要，关系到核酸的纯度，核酸的纯度直接影响下游 PCR 应用。磁棒的振荡幅度和混合时间会影响洗涤效率。磁棒振荡幅度太小或混合时间太短，有杂质残留在磁珠上会影响磁珠吸附核酸的能力。振荡太剧烈或时间太长，会丢失部分核酸或造成核酸的断裂、降解，得率下降。2.洗脱步骤洗脱步骤直接影响核酸得率，影响洗脱效率的因素有磁珠的干燥程度以及洗脱温度和时间。磁珠未充分晾干，可能会有醇类等杂质残留，影响后续 PCR 反应；磁珠过分干燥，核酸可能会干结在磁珠上，导致洗脱效率下降。适当提高洗脱温度和时间，有利于核酸从磁珠上游离下来，时间过长或温度过高，核酸有可能会降解，需要把握其中的平衡。
注意事项：1.裂解液和菌体的比例，为了保证菌体的充分裂解从而达到较佳的提取效果，裂解液和菌体的比例十分重要，要按照实际的实验所需，确定所用菌体的量，之后根据试剂盒的推荐，选择合适的裂解液与菌体比例；2.蛋白质的沉淀，在4℃下蛋白质沉淀效率较高，因此，在加入Solution III后可在4℃静置一段时间并采用4℃离心，以提高蛋白质的去除效果；3.质粒的纯化，碱裂解法提取的质粒DNA不经其它纯化步骤就已经具有了较高的纯度，配合其它纯化方法，如氯仿/醇沉淀、吸附柱等，可以获得纯度很高的质粒；4.RNA的去除，在Solution I 中加入RNase A (100μg/mL) 可以有效的去除RNA残留。为了保证菌体的充分裂解从而达到较佳的提取效果，裂解液和菌体的比例十分重要。
核酸的提取：RNA提取条件较DNA要求严格,主要是因为临床标本及实验室环境在大量对RNA有强烈降解作用RNase.RNase是一类生物活性非常稳定的酶类.这种酶耐核酸的提取核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在，核酸提取的主要步骤为：裂解细胞去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子，去除其他不需要的核酸分子，如提取DNA分子时，应去除RNA，反之亦然。沉淀核酸纯化核酸，去除盐类，有机剂等杂质(一)DNA提取的经典方法DNA提取的经典方法，即所谓的酚-氯仿提取法。 温度过高或时间过长，也有可能导致核酸断裂或醇类挥发导致的提取效率下降。深圳自动核酸提取价格
质粒抽提方法即去除RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质。重庆核酸提取生产公司
提取核酸需要使用pH 8.0的Tris水溶液饱和酚是为什么：苯酚是一种有机溶剂，具有强烈的变性蛋白质的作用，但它可以微溶于水，会残留在DNA所在的水相中，影响DNA的纯度。苯酚使用前需用Tris溶液进行饱和，以减少抽提DNA过程中吸收水分和损失DNA。 Tris溶液调节至pH 8.0，可以使DNA更加稳定地存在于水相中。此外，保存在4℃冰箱中的苯酚，容易被空气氧化变成粉红色，形成醌类物质而易使DNA降解，因此氧化的苯酚不能用于提取核酸，应使用pH 8.0的Tris水溶液再次饱和后使用，较好分装在棕色试剂瓶里，上面覆盖一层Tris水溶液或TE缓冲液，以隔绝空气。重庆核酸提取生产公司
