芯片平台作为目前比较成熟的筛选工具,已经在很多领域有了相应的应用。多家芯片公司在DNA甲基化这块儿有了相应的产品提供,其中应用**为***的就Agilent平台和Illumina平台,相应的产品包括AgilentHumanCpGIslandMicroarrayKit,InfiniumHumanMethylation27BeadChip和InfiniumHumanMethylation450KBeadChip。另外RocheNimbleGen和Affymetrix也有相应的芯片推出,但是NimbleGen的芯片今年下半年已经停产。不同的芯片平台,各自的实验过程也是不一样的。安捷伦前期采用的甲基化DNA免疫共沉淀(MeDIP)技术。将基因组DNA分成两份,一份用来做MeDIP,另一份作为对照。两个样品都标记荧光(富集的样品用Cy5标记,对照用Cy3标记),然后与芯片杂交。芯片上每个探针的Cy5/Cy3强度比例显示出该区域的甲基化程度。 云生物提供甲基化服务。广东WGBS技术服务经验丰富
DNA甲基化对基因表达调控起着动态的重要作用。 借助MethylationEPIC BeadChip,研究人员可以基于单核苷酸分辨率定量检测基因组中的850,000多个甲基化位点。包括FFPE在内的多重样本可以并行分析,以便在每样本比较低成本的情况下实现高通量功能。依托业界**的Infinium实验分析方法,MethylationEPIC BeadChip是全表观基因组关联研究(EWAS)的理想之选。它提供了由**精选的***的覆盖范围,囊括99%的RefSeq基因,95%的CpG岛,高覆盖度的增强子区域和其他内容类别。由于超过90%的Infinium HumanMethylation450K位点内容都涵盖在内,因此新一代MethylationEPIC试剂盒对这些位点也完全支持。广东hMeDIP-Seq技术服务口碑推荐DNA甲基化多发生在CpG二核苷酸中的胞嘧啶的5位碳原子。
随着二代测序技术的告诉发展,测序成本大幅度下降,使得真正实现全基因组甲基化分析的研究成为可能。随着人类甲基化图谱绘制成功,已经陆续有多个物种的甲基化图谱构建完成。研究者将传统的DNA甲基化检测方法,如亚硫酸氢盐转化与高通量测序相结合,可以实现单碱基精度的甲基化图谱的构建。此外将成熟的MeDIP技术与二代测序相结合,可以快速有效地寻找基因组上的甲基化区域,从而比较不同细胞、组织、甚至疾病样本间的DNA甲基化修饰模式的差异。因此该技术也特别适用于大样本量的疾病表观研究。第三代测序技术的出现,更是让甲基化的直接测定成为可能。一年前,美国PacificBiosciences公司利用独有的单分子实时(SMRT)测序技术,直接测定了DNA的甲基化。这项成果发表在《NatureMethods》杂志上。
Chip-Seq 是指通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP)特异性地富集目的蛋白结合的DN**段,并对其进行纯化和文库构建;然后对富集得到的DN**段进行高通量测序,通过将获得的数百万条序列标签精确定位到基因组上,从而获得全基因组范围内与组蛋白、转录因子等互作的 DNA 区段信息,是目前在全基因组水平研究蛋白结合靶DNA序列的重要手段,为转录因子、组蛋白修饰、核小体定位等表观遗传学的研究提供有效方法。
应用领域
1、确定组蛋白修饰的位置及其与基因表达的关系。
2、完成对转录因子及其它蛋白在基因组上结合位点的精细定位。
3、研究特定的核小体或组蛋白的分布。 通过甲基化数据与耐药基因Panel数据联合分析。
荧光定量法(Methylight)
这种技术是在MSP技术上发展起来的,在MSP扩增过程中利用荧光染料进行定量。TaqMan? 探针法的应用使得该技术具有更高的精确性。其原理与SNP检测类似,针对亚硫酸氢盐处理之后的DN**段,在甲基化位点上会存在单碱基的差异,根据这种差异进行探针设计,随后进行实时定量PCR,就能够检测甲基化的差异。这种方法**的优势在于其高敏感性和较高通量,且无需在PCR后电泳、杂交等操作,减少了污染和操作误差。但是TaqMan? 探针订购费用较高,适用于少数位点大量样本筛选。 甲基化验证是甲基化研究必不可少的一环。浙江hMeDIP-Seq技术服务专业服务
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N6-甲基脱氧腺苷(6mA)是原核生物和真核生物的DNA修饰类型之一,在细菌、藻类及植物基因组中***存在,在DNA错配修复、染色体分离和毒力调节中发挥作用。6mA免疫沉淀测序(6mA-IPSeq)通过特异性抗体富集6mA甲基化的DN**段,然后结合高通量测序技术在全基因组水平上以较小的数据量,快速、高效地寻找6mA甲基化区域。技术优势全基因组范围鉴定6mA甲基化修饰区域技术方法适合所有物种(一般推荐藻类及植物)科学方案设计从项目背景了解、协助方案设计、实验材料选取、建库测序,到数据分析每个项目有特定的科学问题;需要专业、有价值的建议;科学、缜密的设计及时高效的沟通;以保障高质量研究成果样本要求:基因组DNA:>=3ug;样品浓度>50ng/ul;无RNA和蛋白污染建库测序:测序策略:IlluminaHiSeq,PE150。 广东WGBS技术服务经验丰富