核酸的提取：核酸一般分为DNA和RNA，将他们从临床标本中提取出来，是进行PCR扩增的前提，DNA和RNA的提取方向大致都是相同的；只是在处理标本中的一些细节方面有所差异。临床中标本多种多样，而我们提取核酸的步骤目的都是一样的。1、除去PCR中的克制物。2、增加靶核酸的浓度，使其能达到目的核酸的浓度范围，让其能成功的扩增。3、增加样本的均一性，以保证测定的精密度和准确度。目前我国的实验室提取核酸的方法多是手工提取，所以也是较容易出现问题的环节。高活性的表面活性基团与核酸分子特异性识别和高效结合。广州自动核算提取试剂盒供应商
为了保证分离核酸的完整性和纯度，在实验过程中，应注意以下事项：1. 尽量简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏；2.减少化学因素对核酸的降解，为避免过酸、过碱对核酸链中磷酸二酯键的破坏，操作多在pH4-10的条件下进行。3.防止核酸的生物降解，细胞内或外来的各种核酸酶消化核酸链中的磷酸二酯键，直接破坏核酸的一级结构，其中DNA酶，需要金属二价离子Mg2 、Ca2 的启动，使用EDTA、柠檬酸盐螯合金属二价离子，基本可以克制DNA酶活性。而RNA酶不但分布普遍，极易污染样品，而且耐高温、耐酸、耐碱、不易失活，所以是生物降解RNA提取过程的主要危害因素。武汉核酸提取公司磁珠法核酸提取过程中的常见误区：某一种磁珠好，就应该在所有试验中效果都好。
核酸检测备选方案的重要性：对于核酸检测实验室来说，除了应常规注意的样本污染之外，频繁的核酸检测会形成大量核酸气溶胶，很易造成PCR产物污染，甚至在检测样本量达到一定程度后，PCR扩增室会大量存在扩增产物，一旦由于实验员疏忽或一些其他原因就会将扩增产物带入核酸提取间或体系配置间而造成扩增体系污染，加上RT-PCR技术及其敏感，故极易造成大批量的检测结果出现假阳性的情况，并且污染产物降解缓慢，不易处置，这样就给核酸检测工作增大了困难。在与多家检测机构的交流中发现，随着检测任务的加大，很易出现对病毒N基因检测的假阳性。
裂解步骤：裂解步骤包括裂解细胞或病原体以及核酸结合到磁珠上两个步骤。1. 样本裂解是核酸提取过程中很关键的一步，只有充分裂解了细胞或病原体，才能释放里面的核酸。病原体样本类型复杂多样，不同样本裂解的难易程度也有差异，样本裂解是否充分直接关系到后续的核酸得率。提高裂解效率可从裂解液成分、裂解温度和时间去考虑。裂解液成分：对于一些难裂解的样本，可以通过提高胍盐浓度以及表面活性剂浓度来增强裂解液的裂解能力。胍盐和表面活性剂可以促使蛋白变性，破坏细胞膜，使核酸和蛋白解离，从而释放更多的核酸。裂解温度和时间：提高温度和增加裂解时间可以让细胞裂解更彻底，得到更多核酸，需要摸索合适的温度和时间；温度过高或时间过长，也有可能导致核酸断裂或醇类挥发导致的提取效率下降。核酸提取利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段。
核酸提取仪配套试剂及其操作步骤：买了仪器后一定要考虑后续使用配套试剂的问题：1）配套试剂是否齐全。不同样本类型的提取试剂盒产品链是否完整2）配套试剂是不是预封装。非预封装的试剂需要实验员用移液器加入裂解液、洗涤液和洗脱液等试剂，并没有减少人工操作时间；3）提取前除了加样本外。是否需要添加蛋白酶K，由于有些公司并没有掌握裂解液中预封装蛋白酶K且常温储存的技术，蛋白酶K需要-20℃单独保存，需即用即加。每个样本多加一步蛋白酶K,96个样本多了10~15min左右的操作时间。4）配套试剂的保存温度。有些厂家的提取试剂需要在2—8℃运输保存，冷链运输增加运输成本，保存需要在冰箱中，而预封装提取试剂体积较大，在用量大特别像**这样大批量的使用，完全没有足够冰箱可以进行一段时间试剂的储存空间。5）提取后的扩增效率。提取核酸时观察磁珠残留率并且检测提取核酸质量！质粒抽提方法即去除RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质。南京全血核酸提取
温度过高或时间过长，也有可能导致核酸断裂或醇类挥发导致的提取效率下降。广州自动核算提取试剂盒供应商
核酸的分离与纯化:核酸的高电荷磷酸骨架使其比蛋白质、多糖、脂肪等其他生物大分子物质更具亲水性,根据它们理化性质的差异,用选择性沉淀、层析、密度梯度离心等方法可将核酸分离、纯化。(1) 酚提取/ 沉淀法:核酸分离的一个经典方法是酚∶氯仿抽提法。细胞裂解后离心分离含核酸的水相,加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25 ∶24 ∶1 体积) 混合液。依据应用目的,两相经漩涡振荡混匀(适用于分离小分子量核酸) 或简单颠倒混匀(适用于分离高分子量核酸) 后离心分离。疏水性的蛋白质被分配至有机相,核酸则被留于上层水相。酚是一种有机溶剂,预先要用STE 缓冲液饱和,因未饱和的酚会吸收水相而带走一部分核酸。广州自动核算提取试剂盒供应商
