核酸提取磁珠使用过程中的几种常见误区:误区:样本取用的越多,提取效果越好在样本不够新鲜或者核酸含量本身就很少的情况下,往往核酸提取效果不好,很多实验人员就会采用多取样本的方式增加核酸提取量。但简单地增加样本取样量,有时会引入过多的杂质,超出裂解液裂解能力,也会使提取效率降低,所以并不推荐通过简单的增加样本取样量的方式来达到增加提取量的目的。如果确实是由于样本量不足而引起的提取量过低,建议在前处理先经过富集或者浓缩步骤再开始提取。或者增加裂解的完全性,使更多的核酸暴露出来也是一种解决方法。核酸是核苷酸单体聚合而成的生物大分子,是生物细胞较基本和较重要的成分。济南核算提取设备
磁珠法核酸提取仪的特点:1. 能够实现自动化、高通量操作。2. 操作简单、快速。3. 安全环保。4. 高纯度,高得率。5. 无污染,且结果稳定。6. 成本低廉,便于普遍应用。7. 可以同时处理不同类型的样本。注意事项:1. 仪器的安装环境:正常的大气压(海拔高度应该低于3000m)、温度20-35℃、典型使用温度25℃、相对湿度10%-80%、畅通流入的空气为35℃或以下。2. 避免将仪器放置在靠近热源的地方,如电暖炉;同时为防止电子元件的短路,应避免水或者其他液体溅入其中。3. 进风口和排风口均位于仪器背面,同时避免灰尘或纤维在进风口聚集,保持风道的畅通。4. 核酸提取仪离其他竖直面至少10cm,5. 仪器接地:为了避免触电事故,仪器的输入电源线必须接地。6. 远离带电电路:操作人员不得擅自拆解仪器,更换元件或进行机内调节必须有持证的专业维修人员完成,不要在接通电源的情况下更换元件。重庆全血核酸提取生产公司注意事项:严禁用手或其他物品触及拭子采样冠、棉签的前端,以免造成污染,影像检测结果。
核酸提取过程中,哪些因素会影响:1.固定剂对DNA的影响固定剂的类型直接影响提取DNA的质量.2.固定时间对DNA的影响固定过程中所发生的组织反应至今尚未被完全理解,虽然理论上讲室温下福尔马林与DNA几乎不发生的,但已发现碱基与组蛋白之间的甲基交联.3.固定温度等其他因素对DNA的影响核酸与固定剂的反应由反应成分、浓度、酸硷度以及温度等因素的调节,其中温度效应显得特别重要.4.组织处理过程对DNA的影响我们发现,从常规组织处理的蜡块中提取的DNA,其大部分分子量晨100bp-10000bp之间,主要分布于100-1500bp,光约1/3的组织所提取DNA>20kb。
详解磁珠法核酸提取过程中的常见误区:磁珠使用的越多,提取效果越好:有很多老师喜欢在提取效果不佳的时候,增加磁珠的用量,认为磁珠多加一点,就能吸上更多的核酸,不得不说这种想法是不可取的。磁珠的主要特点是既可以分散于液体中,也可以在外加磁场作用下以固态方式和液相分离,任何试剂体系,磁珠和液体的比例都应该是有一定阈值的,超过一定的比例,过多的磁珠将因为无法均匀分散于液体中,而丧失其分散的特性,也使得洗涤过程中无法充分增加核酸磁珠和液体接触的效率。而过量的磁珠也会吸附更多的杂质,对于除杂的效果影响非常大。甚至有些时候,过多的磁珠会吸附蛋白酶、溶菌酶等在液体体系中起主要作用的功能成分,导致整个试剂盒效率低下。有很多时候,在提取效果不佳的时候,减少磁珠使用量,反而是提升提取效果的较优途径。磁珠法核酸提取技术是目前市场上临床应用较普遍的自动化核酸提取技术。
PC抽提的关键是,一要混匀彻底,二要用量足够。彻底混匀,才能确保苯酚与蛋白质的充分接触,使蛋白质完全变性。许多人总是担心混匀的剧烈程度是否会对核酸,尤其是基因组DNA造成破坏,实际上大可不必如此小心。剧烈的混匀操作,是会部分打断大分子的基因组DNA,但该破坏作用不会强烈到DNA变成10kb以内的小片段。手剧烈晃动混匀后,基因组DNA的片段,大部分会大于20kb,这个大小,除了一些特别的要求外,对PCR和酶切,都是完全适用的。 样品浓度较低时为了提高收率,可以加入糖原助沉。重庆全血核酸提取生产公司
核酸提取纯化原则和要求:尽可能降低蛋白质、多糖和脂类等大分子物质。济南核算提取设备
核酸的化学性质:①酸效应:在强酸和高温,核酸完全水解为碱基,核糖或脱氧核糖和磷酸。在浓度略稀的的无机酸中,较易水解的化学键被选择性的断裂,一般为连接嘌呤和核糖的糖苷键,从而产生脱嘌呤核酸。②碱效应:1. DNA:当PH值超出生理范围(pH7~8)时,对DNA结构将产生更为微妙的影响。碱效应使碱基的互变异构态发生变化。这种变化影响到特定碱基间的氢键作用,结果导致DNA双链的解离,称为DNA的变性。2.RNA:PH较高时,同样的变性发生在RNA的螺旋区域中,但通常被RNA的碱性水解所掩盖。这是因为RNA存在的2`-OH参与到对磷酸脂键中磷酸分子的分子内攻击,从而导致RNA的断裂。济南核算提取设备