核酸提取纯化原则和要求：1、保证核酸一级结构的完整性。2、排除其它分子的污染（如提取DNA时排除RNA的干扰）。3、核酸样品中不应存在对酶有克制作用的有机溶剂和高浓度的金属离子。4、尽可能降低蛋白质、多糖和脂类等大分子物质。核酸提取纯化方法：1、酚/氯仿抽提法：1956年发明，通过酚/氯仿处理细胞破碎液或者组织匀浆后，在水相中主要溶解以DNA为主的核酸成分，在有机相中主要是脂类物质，蛋白质位于两相之间。2、醇沉淀法：乙醇能够消除核酸的水化层，使带负电荷的磷酸基团暴露出来，NA﹢等带正电荷离子能与磷酸基团结合，形成沉淀。核酸提取仪需要注意的事项：避免将仪器放置在靠近热源的地方。深圳自动核酸提取哪家质量好
裂解步骤：裂解步骤包括裂解细胞或病原体以及核酸结合到磁珠上两个步骤。1. 样本裂解是核酸提取过程中很关键的一步，只有充分裂解了细胞或病原体，才能释放里面的核酸。病原体样本类型复杂多样，不同样本裂解的难易程度也有差异，样本裂解是否充分直接关系到后续的核酸得率。提高裂解效率可从裂解液成分、裂解温度和时间去考虑。裂解液成分：对于一些难裂解的样本，可以通过提高胍盐浓度以及表面活性剂浓度来增强裂解液的裂解能力。胍盐和表面活性剂可以促使蛋白变性，破坏细胞膜，使核酸和蛋白解离，从而释放更多的核酸。裂解温度和时间：提高温度和增加裂解时间可以让细胞裂解更彻底，得到更多核酸，需要摸索合适的温度和时间；温度过高或时间过长，也有可能导致核酸断裂或醇类挥发导致的提取效率下降。南京自动核算提取试剂盒报价磁珠分离技术是一种简单高效的核酸提纯方法。
离心柱技术是用于微量核酸分离纯化的较为简单的方法，属于硅吸附方法的一种，在原理上可分为三个部分：①利用裂解液促使细胞破碎，使细胞中的核酸释放出来。②把释放出来的核酸特异吸附在特定的硅载体上，这种载体只对核酸有较强的亲和力和吸附力，对其他生化成分如蛋白质、多糖、脂类则基本不吸附，因而离心时被甩出柱子。③把吸附在特异载体上的核酸用洗脱液洗脱下来，分离得到纯化的核酸。磁珠法：依据与硅胶膜离心柱相同的原理，运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后，制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。
核酸的提取：核酸的提取方式：1、选择等比例的蛋白酶K；是多数核酸提取的关键试剂。该酶在较广的pH范围（4〜12.5)内及高温 (50〜70°C)均有活性，用于质粒或基因组 DNA、RNA的分离，一般孵育1h。2、加入裂解液；一般裂解液都含有去污剂和盐；盐除了提供一个合适的裂解环境，还可以克制标本中的核酸酶对核酸的破坏，起到一个维持核酸结构稳定的作用。去污剂（SDS等）则是通过蛋白质变性，破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白质，从而使核酸游离于裂解体系中。3、加入乙醇；乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。使用乙醇对核酸进行漂洗，使残留的杂质溶解于乙醇，并较终通过离心去除。并可以去除DNA中的残留杂质。4、加入洗液，洗液目的也是洗去核酸中的杂质和克制物，一般洗液中都会加入一定比例的乙醇。5、较后加入TE（TE=Tris+EDTA），对DNA的构象有保护作用，TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液是保存。磁珠法核酸提取技术是目前市场上临床应用较普遍的自动化核酸提取技术。
核酸提取方法的选择：本研究发现手工过柱提取的方法漏检率较低，而且敏感性比其他方法更高，但该方法耗时较长，尤其样本量大时，频繁的离心过柱使得时间成本很大增加，所以并不推荐用于大批量样本的筛查；而磁珠法由于能配合使用自动核酸提取仪，所以能有效节约时间和人工成本，非常适合对大批量样本的核酸提取，但本研究中所使用的两种磁珠提取方法，进口试剂的提取效果明显高于国产试剂，这提示国内的生产商要不断提高产品质量与技术含量，从而降低国内检测机构对国外试剂的依赖性。对于一步检测法来说，由于该法光光将10 μl的样本加入至反应体系中，降低了病毒在反应体系中的存在概率。由于该法漏检率高且敏感度较低，所以并不推荐使用。磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。苏州自动核算提取设备报价
核酸提取仪需要注意的事项：进风口和排风口均位于仪器背面。深圳自动核酸提取哪家质量好
核酸分离与纯化的步骤：(1) 机械作用:包括低渗裂解、超声裂解、微波裂解、冻融裂解和颗粒破碎等物理裂解方法。这些方法用机械力使细胞破碎,但机械力也可引起核酸链的断裂,因而不适用于高分子量长链核酸的分离。有报道超声裂解法提取的核酸片段长度从< 500bp ～ > 20kb 之间,而颗粒匀浆法提取的核酸一般< 10kb。(2) 化学作用:在一定的p H 环境和变性条件下,细胞破裂,蛋白质变性沉淀,核酸被释放到水相。上述变性条件可通过加热、加入表面活性剂(SDS、Triton X-100 、Tween 20 、NP-40 、CTAB、sar-cosyl 、Chelex-100 等) 或强离子剂(异硫氰酸胍、盐酸胍、肌酸胍) 而获得。而p H 环境则由加入的强碱(NaOH) 或缓冲液 ( TE、STE 等) 提供。在一定的p H 环境下,表面活性剂或强离子剂可使细胞裂解、蛋白质和多糖沉淀,缓冲液中的一些金属离子螯合剂( EDTA 等) 可螯合对核酸酶活性所必须的金属离子Mg2+ 、Ca2+ ,从而克制核酸酶的活性,保护核酸不被降解。深圳自动核酸提取哪家质量好
