核酸的提取:RNA提取条件较DNA要求严格,主要是因为临床标本及实验室环境在大量对RNA有强烈降解作用RNase.RNase是一类生物活性非常稳定的酶类.这种酶耐核酸的提取核酸包括DNA、RNA两种分子,在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在,核酸提取的主要步骤为:裂解细胞去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子,去除其他不需要的核酸分子,如提取DNA分子时,应去除RNA,反之亦然。沉淀核酸纯化核酸,去除盐类,有机剂等杂质(一)DNA提取的经典方法DNA提取的经典方法,即所谓的酚-氯仿提取法。 磁珠法核酸提取试剂盒,是生物科学和纳米材料相结合的高新技术产品。北京自动核酸提取直销厂家
核酸提取磁珠使用过程中的几种常见误区:某一种磁珠好,就应该在所有试验中效果都好磁珠的种类是多种多样的,粒径大小不同,分散性不同,磁响应时间不同,包被基础基质不同,外层修饰官能团不同,包被密度不同,官能团臂长不同,会导致磁珠特性千差万别。所以不同磁珠所适应的实验和体系也是不同的。就像同样是核酸提取的试剂,配方也并不完全相同,同样应用于核酸提取的磁珠,性质也并非完全一致。有的磁珠在常量核酸提取中表现出了更高的吸附效率,有的磁珠更适用于微量核酸提取。有的磁珠适合偏酸性系列的试剂体系,有的磁珠适合偏碱性系列的试剂体系。有的磁珠磁响应性好但是沉降速度快,更适合磁棒式自动提取仪;南京全血核算提取设备哪家质量好核酸提取仪需要注意的事项:不要在接通电源的情况下更换元件。
核酸的物理性质:①黏性:DNA的高轴比等性质使得其水溶液具有高黏性,很长的DNA分子又易于被机械力或超声波损伤,同时黏度下降。② 浮力密度:可根据DNA的密度对其进行纯化和分析。在高浓度分子质量的盐溶液(CsCl)中,DNA具有与溶液大致相同的密度,将溶液高速离心,则CsCl趋于沉降于底部,从而建立密度梯度,而DNA较终沉降于其浮力密度相应的位置,形成狭带,这种技术成为平衡密度梯度离心或等密度梯度离心。③稳定性:核酸的结构相当稳定,其主要原因有1、碱基对间的氢键2、碱基的堆积作用3、环境中的阳离子。
核酸提取方法介绍:1.阴离子去污剂法:蛋白质在SDS或二甲苯酸钠等去污剂的作用下变性,DNA能够直接从生物材料中提取,因为常常借静电引力或配位键结合来时细胞中DNA与蛋白质结合,而阴离子去污剂可以对这种价键起到破坏作用,因此,阴离子去污剂以常用于DNA的提取。2.苯酚抽提法:苯酚不光能够作为蛋白变性剂,同时还能够对DNase的降解起到克制作用,使用苯酚对匀浆液进行处理的时候,因为蛋白与DNA联结键已经断裂,又有很多与苯酚相似相溶的极性基团位于蛋白分子表面。DNA溶于水相,蛋白分子溶于酚相。离心分层后将水层取出,多次重复操作,再和含DNA的水相合并,利用醇不能够溶解核酸的性质,使用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。这种方法具有能够提取保持天然状态的DNA的特点。磁珠法核酸提取过程中的常见误区:试剂使用的越多,提取效果越好。
核酸提取纯化方法:1、层析柱法:通过特殊硅基质吸附材料,能够特定吸附DNA,而RNA和蛋白质顺利通过,然后利用高盐低PH结合核酸,低盐高PH值洗脱,来分离纯化核酸。2、热裂解碱法:碱法提取主要是利用共价闭合环状质粒与线性染色质在拓扑学上的差异来分离他们,在碱性下,变性蛋白是可溶的。3、煮沸裂解法:加热处理DNA溶液,利用线性DNA分子的特性,通过离心将DNA段与变性蛋白质和细胞碎片形成的沉淀分离。4、纳米磁珠法:运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后,制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。利用氧化硅纳米微球的超顺磁性,在Chaotropic盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下,从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出DNA和RNA。核酸提取纯化原则和要求:尽可能降低蛋白质、多糖和脂类等大分子物质。济南核酸提取销售厂家
磁珠法核酸提取过程中的常见误区:洗涤次数越多,提取效果越好。北京自动核酸提取直销厂家
检测种类:01采集口咽拭子点燃酒精灯→张口发“啊”音,暴露咽喉(必要时用压舌板将舌压下)→取出培养管中的拭子轻柔、迅速的擦拭两腭弓、咽及扁桃体。02采集鼻咽拭子头部保持不动,去除鼻前孔中表面的分泌物→通过鼻腔轻轻、缓缓插入拭子至鼻咽部→当遇到阻力后即到达后鼻咽,停留数秒吸取分泌物。03区别鼻咽拭子优点:(1)可以在咽部停留较长的时间,以便获得更足量的标本,这也是文献报道其阳性率高于口咽拭子的原因。(2)我们的暴露风险相对口咽拭子更低,因为取样时医生是可以站在我们的侧后方操作,我们的口腔不会被直视,心理压力不会有那么大,而且基本不出现咽反射,我们只需下拉口罩*露出鼻孔,不需暴露口腔。北京自动核酸提取直销厂家