体液样本收集外泌体。1、选择血清还是血浆?推荐大多数研究选择血浆。血液凝固过程中血小板会产生大量外泌体,含量占血清中外泌体的50%以上,选择血浆可避免不必要的影响。2、注意抗凝剂的选择肝素类抗凝剂与PCR假阴性有关,这可能是因为肝素与引物和/或酶有竞争作用。除了***PCR,肝素可以与外泌体结合,阻止细胞摄取外泌体。因此需要记录肝素类药物治疗的患者的血液样本。EDTA和双嘧达莫(CTAD),CTAD可以阻止血小板的***并***其释放外泌体。EDTA可能会干扰PCR反应(尽管其程度小于肝素),但是还是优于其他选择。此外,有研究表明钙螯合剂可在体外促进外泌体与血小板的结合从而降低经EDTA、或柠檬酸盐处理后的血液样本中外泌体的表观数量。使用肝素时这种影响就不会发生,因此建议在测量外泌体的精确数量时选用肝素。但是也有研究表明肝素可以导致体外条件下外泌体的减少。总之,目前尚需要更多的研究论证抗凝剂是否及如何对外泌体的释放,作用和下游反应产生特异性影响。 云生物就带您了解一下外泌体的特点。上海数据库外泌体报价
外泌体的相关成分:⊙外泌体的膜同细胞一样,是磷脂双分子层
⊙外泌体膜含有MHC-1/2蛋白,能绑定特异性的肽链
⊙外泌体膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2
⊙外泌体膜中有膜转运融合蛋白annexins、RAN、GTPases
⊙外泌体膜上有脂质筏Chol、ceramide、SM、PC,限制膜流动,参与包括跨膜信号转导、物质内吞、脂质及蛋白定向分选的多种功能
⊙外泌体中含有核酸,包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA;同时还有一些蛋白、脂类也能被包裹到外泌体中
⊙与外泌体产生相关的重要分子:Ral、ARF6、PLD2、RAB家族
⊙一些物质进行外泌体中是特异性的:如hnRNPA2B1能结合lncRNA或miRNA特异性的序列(GGAG/CCCU),进行主动包埋 四川样本制备外泌体服务血清样品抽提外泌体需要提供多少量?
目前,外泌体研究主要集中在以下几个方向:开发疾病诊断和预后标志物揭示疾病发病机制作为药物载体,实现靶向给药作为疾病***的靶点参与免疫反应调控。外泌体蛋白质组学服务:云生物根据主流外泌体研究策略,开发了一套完整的外泌体蛋白质组学研究技术服务体系。提供从外泌体收集、鉴定到蛋白质组定性定量、数据分析一系列的技术服务项目,确保外泌体研究在同样技术标准下获得高质量研究数据。外泌体收集:对于外泌体研究,分离和收**格的外泌体是非常关键的一步。目前对于外泌体收集有:超速离心、密度梯度离心、超滤、磁珠免疫、聚合物沉淀与试剂盒提取法等几种主要方法,各种方法均存在不同优缺点。云生物在现有试剂盒法的基础上进行大量技术优化,形成了一套针对不同样品的外泌体提取试剂盒和配套收集方法。可以在提高外泌体收集丰度的同时,***减少杂蛋白残留,以保证蛋白质组分析阶段获得的数据更加稳定和可靠。
2019**火的7大热点方向,纵观2019年的国自然评审结果,非编码 RNA、m6A、外泌体、**免疫、细胞自噬、肠道菌群、干细胞等大方向属于科研热点。外泌体在生物学过程中扮演着重要角色,以及它作为疾病诊断与***的特殊功能。其在基金中一般存在有两种作用途径,一种是作为靶向***病灶的载体,一种是促进疾病进程的因素来研究。外泌体与miRNA的热点交互这两年也一直中标数相当可观,2019年外泌体相关项目多达519项,高于2018年的420项,热度稳中有升。
外泌体的优势您了解多少呢?
外泌体内包含多种不同分子,如蛋白质、脂质、DNA、mRNA和miRNA,其中miRNA受到**多的关注,由于它们在基因表达调控上有着重要作用。Goldieetal.发现在所有的小RNA中,miRNA在外泌体中所占的比例比它们的来源细胞更高。有证据显示,miRNA并不是随机整合入外泌体中的。Guduric-Fuchsetal.分析了许多不同细胞系和它们各自分泌的外泌体中miRNA的表达水平,发现一些miRNA亚群,如miR-150,miR-142-3p,miR-451更偏好于进入外泌体。类似的是,Ohshimaetal.比较了不同*细胞株分泌的外泌体中的let-7miRNAfamilymembers的表达水平,将胃*细胞株AZ-P7a的外泌体与其他细胞株如肺*细胞株SBC-3/DMS-35/NCI-H69,结直肠*细胞株SW480/SW620和胃*细胞株AZ-521的外泌体中的let-7miRNA家族的表达水平。结果是,他们发现let-7miRNA家族在胃*细胞株AZ-P7a分泌的外泌体中较丰富,但是不如其他细胞株中含量多。 云生物抽提的外泌体质量上乘。上海数据库外泌体报价
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分离:超速离心法:超速离心法是外泌体分离**常见的技术之一。据不完全统计,约有1/2的研究者会选择该种方式分离外泌体。该方法由几个离心步骤组成,可分步去除细胞、细胞碎片和大囊泡,沉淀外泌体。但该种方法用于血浆和血清等粘性生物液体时效率较低,且重复离心操作有可能对外泌体造成损害,从而降低其质量。如将超速离心配合蔗糖溶液进行梯度密度离心可得到纯度更高的外泌体,是公认可以得到**高纯度的分离方法。但此法对离心时间非常敏感,一般需要8-30h,产率较低,同样不适用于血浆和血清等粘性生物液体中外泌体的分离,因此难以***普及。聚合物沉淀法:第二大主流的外泌体分离技术就是基于聚合物的沉淀法了,**常见的聚合物是聚乙二醇(PEG)。通常将含有聚合物的沉淀溶液与生物体液混合,4℃温育,低速离心,沉淀外泌体。目前已有成熟的PEG-base商业试剂盒,比如图中的ExoQuick™(SystemBiosciences)。这类试剂盒使用容易和快速,不需要额外的设备,且随着产品不断更新换代,提取效率和纯化效果逐渐提高,因而逐渐取代超速离心法并推广开来。沉淀法的主要缺点是分离物中会有少量的聚合物存在。不过大家不用担心,一般来说这些物质不会干扰下游分析。上海数据库外泌体报价