技术优势
1、ChIP-Seq 能实现真正的全基因组分析。目前所能获得的芯片上固定的探针只能**全基因组部分序列,所获得的杂交信息具有偏向性。
2、对于结合位点分析,ChIP-Seq 通过寻找“峰”,结合分辨率可精确到10~30 bp,而芯片上探针由于长度所限,无法精确定位,即使目前比较高水平的商业芯片都无法提供可与ChIP-Seq 媲美的分辨率。
3、是所需样本数量。ChIP-chip 需要多达4~5 μg?的起始样本,在杂交之前需要进行LM-PCR,但可能导致背景增高,竞争性扩增等导致假阳性。而ChIP-Seq *需要纳克级起始材料,如SOLiD 起始材料可低至20ng。 中小样本筛选, 大样本中进一步验证。辽宁RIP-seq技术服务专业服务
甲基化特异性PCR(MS-PCR)
DNA在亚硫酸氢盐作用后,DNA CpG若无甲基化,则序列中的C改变为U,若有甲基化则保持不变,因此从理论上讲,用不同的引物做PCR,即可检测出这种差异,从而确定基因有无CpG岛甲基化。因此根据目的基因修饰前后的改变,就可以相应设计M和U引物,有时我们需要设计两轮引物。
这种方法灵敏度高,无需特殊仪器,因此经济实用,是目前应用**为***的检测方法。不过也存在一定的局限性,预先需要知道待测片段的DNA序列,引物的设计非常重要。另外,亚硫酸氢盐处理也十分关键,若处理不完全则可能导致假阳性的出现。 RIP-seq技术服务方案WGBS技术及应用是有力方案。
cfDNA,cellfreeDNA,就是血液中游离的自身DNA,这些DNA多是从身体的细胞或者白血球破裂释放出来的,基本上都是无害的,不用多久会被自身清理掉。不过值得一提的是,当孕妇怀孕的时候,胎儿的DNA也会同时释放到母亲的血液里头去,这是当前火热的无创唐氏筛查的基础。通过抽取母亲的外周血测序分析其中的游离DNA就可以判断胎儿是否存在整个染色体或者大片段DNA的变异。有研究已经证实,**患者外周血中的cfDNA总量,要高于健康人。通过这一点,虽然不能武断的说cfDNA能成为**标志物,但是cfDNA的含量增多,能起到一个较好的提示作用,作为一个初筛的手段。基于cfDNA的液态活检中,尽管ctDNA在**诊断中的应用是当下cfDNA*****,研究**深入的分支。但是,cfDNA作为液态活检,不只是局限于**学。例如,有研究报道对于接受***移植手术的病人,可以通过监测术后外周血中具有捐献者基因特征,片段化的cfDNA含量变化,来评估移植***的排斥情况。
发育基因的表观突变是养殖欧洲鲈鱼开始驯化的基础
Epimutations in developmental
genes underlie the onset of domestication in farmed European sea bass. Mol Biol Evol. 2019 May 30 (IF= 14.797)
本研究通过RRBS测序,比较了早期驯化的
(n=12)与野生的(n=12)
欧洲鲈鱼在驯化过程中DNA甲基化变化,发现早期驯化的鲈鱼与野生的没有遗传差异,但在不同胚胎起源的组织中发生DNA甲基化变化。这些甲基化突变与经过25年选择性育种后的胞嘧啶至胸腺嘧啶多态性***重叠,表观突变基因与正选择基因一致。结果表明驯化初始阶的表观变异是一个重要事件。 WGBS和RRBS都是金标准技术, CNS发表文章都很多,广发被接受。
N6-甲基脱氧腺苷(6mA)是原核生物和真核生物的DNA修饰类型之一,在细菌、藻类及植物基因组中***存在,在DNA错配修复、染色体分离和毒力调节中发挥作用。6mA免疫沉淀测序(6mA-IPSeq)通过特异性抗体富集6mA甲基化的DN**段,然后结合高通量测序技术在全基因组水平上以较小的数据量,快速、高效地寻找6mA甲基化区域。技术优势全基因组范围鉴定6mA甲基化修饰区域技术方法适合所有物种(一般推荐藻类及植物)科学方案设计从项目背景了解、协助方案设计、实验材料选取、建库测序,到数据分析每个项目有特定的科学问题;需要专业、有价值的建议;科学、缜密的设计及时高效的沟通;以保障高质量研究成果样本要求:基因组DNA:>=3ug;样品浓度>50ng/ul;无RNA和蛋白污染建库测序:测序策略:IlluminaHiSeq,PE150。 RRBS用于人、哺乳动物及鱼类方向的高水平甲基化研究。四川ATAC技术服务怎么样
焦磷酸测序能提供杂合子缺失及细菌和病毒分型等技术服务。辽宁RIP-seq技术服务专业服务
WGBS送样要求一、送样类型基因组DNA、细胞、全血、动植物组织、FFPE二、保存方式1、基因组DNA、细胞、全血、动植物组织:放-20℃冰箱中保存,或者放-80℃冰箱中长期保存(1年以内);保存期间避免反复冻融。2、FFPE样本:室温保存三、运输条件1、基因组DNA:冰袋或者干冰运输;2、细胞、全血、组织样本:干冰运输,顺丰陆运(3-4天时间),夏季10-15公斤干冰;秋冬季10公斤干冰;3、FFPE样本:室温运输。四、样本量要求1、基因组DNA:常规WGBS,不少于2ug;微量WGBS,20ng1)提供样本DNA完整性质检结果,例如琼脂糖凝胶电泳或者Agilent2100电泳等;2)提取基因组DNA,要加RNA酶,去除RNA污染;3)提取基因组DNA,溶到TE或者elutionbuffer,避免溶解到纯水;样本体积不超过100ul;4)提供Qubit检测浓度,基于OD值的检测方法,例如NanoDrop,会严重高估浓度。2、细胞样本:常规WGBS,不少于5x10*6个细胞;微量WGBS,5000个细胞1)收集贴壁或者悬浮细胞、使用预冷的1×PBS,洗涤2次,600g离心5分钟;2)***一次离心后,尽量去除上清PBS,保留细胞沉淀;3、全血样本:2-5ml外周血使用普通EDTA抗凝管,避免使用肝素抗凝管。4、动植物组织:动物组织,30mg以上;植物组织,不同组织。 辽宁RIP-seq技术服务专业服务