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    外泌体（Exosome）是活细胞分泌的来源于晚期核内体(也称为多囊泡体)的直径30-150nm的纳米级脂质包裹体结构，密度，内部包裹了蛋白质、mRNA和microRNA等物质。包括**细胞在内的几乎所有类型的细胞，都可以产生并释放外泌体。外泌体由细胞分泌释放出来，在血液等体液内传播，***又可被其他细胞吞噬，是细胞间通讯的重要介质。外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳等，而不同组织来源的外泌体在内容物组成和功能方面存在差异，同时这种差异受到细胞外基质和微环境的动态调控。越来越多的证据表明，宿主细胞或**细胞分泌的外泌体参与了**发生、生长、侵袭和转移。对外泌体的分析和检测可以辅助疾病的早期诊断、疗效评价和预后分析。 外泌体的优点有很多。安徽WB外泌体报价

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    分离:超速离心法:超速离心法是外泌体分离**常见的技术之一。据不完全统计，约有1/2的研究者会选择该种方式分离外泌体。该方法由几个离心步骤组成，可分步去除细胞、细胞碎片和大囊泡，沉淀外泌体。但该种方法用于血浆和血清等粘性生物液体时效率较低，且重复离心操作有可能对外泌体造成损害，从而降低其质量。如将超速离心配合蔗糖溶液进行梯度密度离心可得到纯度更高的外泌体，是公认可以得到**高纯度的分离方法。但此法对离心时间非常敏感，一般需要8-30h，产率较低，同样不适用于血浆和血清等粘性生物液体中外泌体的分离，因此难以***普及。聚合物沉淀法:第二大主流的外泌体分离技术就是基于聚合物的沉淀法了，**常见的聚合物是聚乙二醇（PEG）。通常将含有聚合物的沉淀溶液与生物体液混合，4℃温育，低速离心，沉淀外泌体。目前已有成熟的PEG-base商业试剂盒，比如图中的ExoQuick™（SystemBiosciences）。这类试剂盒使用容易和快速，不需要额外的设备，且随着产品不断更新换代，提取效率和纯化效果逐渐提高，因而逐渐取代超速离心法并推广开来。沉淀法的主要缺点是分离物中会有少量的聚合物存在。不过大家不用担心，一般来说这些物质不会干扰下游分析。

细胞上清（需采用去除外泌体的培养基）：

(1) 细胞在正常含有血清的培养基中培养一定时间，贴壁细胞密度在70 %-80 %，悬浮细胞密度在60 %-70 %；

(2) 对于贴壁细胞，去除原有培养基，换为新的不含外泌体的培养基或者无血清培养基；对于悬浮细胞，300 g，4°C，10 min收集细胞；

(3) 使用不含外泌体的培养基或者无血清培养基悬浮细胞并继续培养。细胞继续培养24-48 小时，根据细胞的生长速度确定收取上清时间；

(4) 收集细胞上清，300 g，4°C，离心10 min；小心吸取上清，注意避免吸入细胞或者细胞碎片；

(5)   3000 g，4°C，再次离心15 min，确保将细胞或者细胞碎片去除干净；

(6) 取上清，注意避免吸入细胞或者细胞碎片，合并相同的细胞培养液上清样品，装入无菌的玻璃瓶，可在4°C短期保存（1-2天），长期保存可冻存于-80°C 。建议细胞上清分离后尽快进行外泌体分离，保存在4°C和-80°C，都会对产量有一定的影响。

    Nature：从血液通过exosomes入手早期确诊**。根据德克萨斯大学MD安德森**中心的一项研究，存在于**外泌体(exosomes)上的glypican-1(GPC1)基因编码蛋白，或许可以作为一种潜在非侵入性诊断和筛查工具的组成部分，用来检测有可能尚处于适合手术***阶段的早期胰腺*。这项研究工作发布在6月24日的《自然》(Nature)杂志上。外泌体是由*细胞分泌的一种微型病毒样大小的颗粒，其中包含着DNA、RNA和蛋白质。科学家们从胰腺*患者血液中分离出富含GPC1的循环外泌体——GPC1+crExos，并对其进行了监测。**生物学教授RaghuKalluri博士说：“我们在来自大约250名胰腺*患者的少量血清中检测到了GPC1+crExos，这一检测***的特异和敏感，重要的是将慢性胰腺炎患者与早期和晚期胰腺*患者区分了出来。”Kalluri说：“在手术切除**后患者体内的GPC1+crExos水平***下降。”该研究还检测了来自健康供体、乳腺*和胰腺*患者的crExos。在两种**中都可以看到GPC1+crExos增高。 外泌体的好处有很多。天津电镜外泌体报价

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   作者就在miR-19a安装了一个“监视器”，然后转染到星形胶质细胞内，再与**细胞，CAF共培养，在光镜和荧光图像下追踪到，miR-19a转移到了**细胞内，且在******显微镜下观察到了星形胶质细胞培养基有较多的外泌体（相较于CAF)。并一再证明是外泌体将miR-19a运载到**细胞：体外干扰外泌体；体内干扰外泌体；干扰外泌体后再加入外泌体。得出第三个结论：星形胶质细胞分泌的外泌体，将靶向PTEN的miR-19a转运到**细胞。 安徽WB外泌体报价