技术优势
1、ChIP-Seq 能实现真正的全基因组分析。目前所能获得的芯片上固定的探针只能**全基因组部分序列,所获得的杂交信息具有偏向性。
2、对于结合位点分析,ChIP-Seq 通过寻找“峰”,结合分辨率可精确到10~30 bp,而芯片上探针由于长度所限,无法精确定位,即使目前比较高水平的商业芯片都无法提供可与ChIP-Seq 媲美的分辨率。
3、是所需样本数量。ChIP-chip 需要多达4~5 μg?的起始样本,在杂交之前需要进行LM-PCR,但可能导致背景增高,竞争性扩增等导致假阳性。而ChIP-Seq *需要纳克级起始材料,如SOLiD 起始材料可低至20ng。 中小样本筛选, 大样本中进一步验证。上海hMeDIP-Seq技术服务售后分析
甲基化特异性PCR(MS-PCR)
DNA在亚硫酸氢盐作用后,DNA CpG若无甲基化,则序列中的C改变为U,若有甲基化则保持不变,因此从理论上讲,用不同的引物做PCR,即可检测出这种差异,从而确定基因有无CpG岛甲基化。因此根据目的基因修饰前后的改变,就可以相应设计M和U引物,有时我们需要设计两轮引物。
这种方法灵敏度高,无需特殊仪器,因此经济实用,是目前应用**为***的检测方法。不过也存在一定的局限性,预先需要知道待测片段的DNA序列,引物的设计非常重要。另外,亚硫酸氢盐处理也十分关键,若处理不完全则可能导致假阳性的出现。 四川TBS技术服务欢迎咨询FFPE样本只需要室温运输。
亚硫酸盐结合测序是DNA甲基化检测的“金标准”方案。除了全基因组甲基化测序等研究手段,对于目标基因/位点检测或者转化医学应用研究来说,需要灵活的靶向甲基化测序方案。BSP(BisulfiteSequencingPCR)结合高通量测序的TargetBisulfiteSequencing满足几个到上百个基因/位点的验证需求,具有高通量、低成本的优势,***用于临床大样本多位点的甲基化biomarker筛选及高水平文章甲基化验证环节。微生物定植对肠道免疫和代谢相关基因DNA甲基化的影响——团队成员发表.(IF=)我们以早产幼猪为模型,利用RRBS测序比较正常(n=7)和口服***(n=7)的肠道DNA甲基化差异,发现与先天免疫应答、吞噬和代谢等相关基因的DNA甲基化和表达存在***的差异,并通过高通量BSP测序对EGFL7、LBP8、PTPRE差异甲基化基因进行了验证。
相比之下,VeraCode GoldenGate甲基化分析技术更适合中通量的筛选及验证研究,它以以矩阵微珠芯片(Sentrix Array Matrix(SAM))形式分析48至384个用户指定的CpG位点。首先,将亚硫酸氢盐处理的基因组DNA 与分析oligo混合,oligo与未甲基化位点的U互补,或者与甲基化位点的C互补。杂交之后,引物延伸,并连接上位点特异的oligo来产生通用 PCR的模板。***,用标记的PCR引物生成可检测的产物。据Illumina的产品**介绍,其产品的**优势在于单个CpG位点的分辨率。其它分析将甲基化定位在一段区域,而通过Illumina分析,你能精确测定某个CpG位点的甲基化水平。不同的芯片平台,各自的实验过程也是不一样的。
DNA甲基化异常用于甲状腺结节诊断
Identification of
Tissue-Specific DNA Methylation Signatures for Thyroid Nodule Diagnostics. Clin
Cancer Res. 2019;15;25(2):544-551 (IF=
10.199)
恶性结节和良性结节常常难以诊断。本课题通过RRBS检测了109个甲状腺组织的DNA甲基化,发现*旁、良性结节和*组织之间存在***差异,并在65个甲状腺结节的回顾性队列样本中得到验证。这些组织特异性DMR与活性增强子和**相关基因密切相关,表明DNA甲基化为甲状腺结节提供准确的诊断。 ChIP-Seq 能实现真正的全基因组分析。辽宁RIP-seq技术服务方案
ATAC-seq实验过程短,从实验到分析可达2周。上海hMeDIP-Seq技术服务售后分析
甲基化DNA免疫沉淀测序(MethylatedDNAImmunoprecipitationSequencing,MeDIP-Seq)是通过5mC特异性抗体富集甲基化的DN**段,然后结合高通量测序技术在全基因组水平上以较小的数据量,快速、高效地寻找甲基化区域。可广泛应用于甲基化与疾病关系研究。技术优势全基因组范围鉴定甲基化修饰区域针对性检测基因组内具有甲基化修饰的区域与WGBS技术相比,成本更低科学方案设计从项目背景了解、协助方案设计、实验材料选取、建库测序,到数据分析每个项目有特定的科学问题;需要专业、有价值的建议;科学、缜密的设计及时高效的沟通;以保障高质量研究成果样本要求:基因组DNA:>=3ug;样品浓度>50ng/ul;无RNA和蛋白污染建库测序:测序策略:IlluminaHiSeq,PE150。 上海hMeDIP-Seq技术服务售后分析