江苏TBSDNA甲基化共同合作

联合亚硫酸氢钠的限制性内切酶分析法（COBRA）：这种方法是将亚硫酸氢盐处理与酶切相结合来进行甲基化检测。DNA样本经亚硫酸氢盐处理后，利用PCR扩增。扩增产物纯化后用限制性内切酶（BstUI）消化。若其识别序列中的C发生完全甲基化(5mCG5mCG)，则PCR扩增后保留为CGCG，BstUI能够识别并进行切割；若待测序列中，C未发生甲基化，则PCR后转变为TGTG，BstUI识别位点丢失，不能进行切割。这样酶切产物再经电泳分离、探针杂交、扫描定量后即可计算出原样本中甲基化的比例。这种方法**的优点就是相对简单，可进行快速定量，且需要的样本量少。然而，它的局限性也十分明显，只能获得特殊酶切位点的甲基化情况，且阴性结果并不能排除样品DNA中存在甲基化的可能。提供样本DNA完整性质检结果。江苏TBSDNA甲基化共同合作

相比之下，VeraCode GoldenGate甲基化分析技术更适合中通量的筛选及验证研究，它以以矩阵微珠芯片(Sentrix Array Matrix(SAM)）形式分析48至384个用户指定的CpG位点。首先，将亚硫酸氢盐处理的基因组DNA 与分析oligo混合，oligo与未甲基化位点的U互补，或者与甲基化位点的C互补。杂交之后，引物延伸，并连接上位点特异的oligo来产生通用 PCR的模板。***，用标记的PCR引物生成可检测的产物。据Illumina的产品**介绍，其产品的**优势在于单个CpG位点的分辨率。其它分析将甲基化定位在一段区域，而通过Illumina分析，你能精确测定某个CpG位点的甲基化水平。浙江oxBSDNA甲基化售后分析CpG岛常位于基因转录调控区附近。

Sequenom MassArray甲基化检测：将待测DNA经过亚硫酸盐处理，通过PCR扩增过程引入T7启动子序列，经T7 DNA聚合酶的体外转录过程得到各样本RNA产物，经碱基特异性酶切处理，得到RNA小片段，并用飞行质谱检测每个片段的分子量，***EpiTYPER程序完成数据的自动化处理并报告每个检测片段的甲基化程度。技术优势：·检测片段长：扩增片段长度可达500bp·高灵敏度：可发现低至5%甲基化水平，样本起始量低至10ng。·重复性好：变异系数CV≤5%。·高性价比：用384孔板进行PCR反应，一个扩增产物可以进行多重CpG位点分析，无需后续验证，可直接用于文章发表。

作为比较高性价比的甲基化研究方法，RRBS在大规模临床样本的研究中具有***的应用。技术优势：从项目背景了解、协助方案设计、实验材料选取、建库测序，到数据分析，每个项目有特定的科学问题；需要专业、有价值的建议；科学、缜密的设计；及时高效的沟通；以保障高质量研究成果。分析包括：测序数据质量评估，与参考基因组比对，酶切效率分析，甲基化位点Calling，甲基化图谱分析，样本见间甲基化水平比较分析，多样本分析，多组学整合分析。RRBS开发的初衷就是为人和哺乳动物，提供全基因组范围的、高性价比的甲基化检测金标准方案。

上皮型钙黏附素（E-cadherin）是介导细胞间粘附的一种跨膜糖蛋白，其编码基因CDH-1属于**侵袭转移抑制基因。在**组织中，E-cadherin表达的下调或沉默可导致细胞间相互黏附力减弱，造成**细胞的分散，脱离原发灶处而转移。而E-cadherin下调的因素之一就是其启动子区域CpG岛的超甲基化。**细胞突破血管内皮及基底膜进入血循环是**细胞侵袭和转移的重要步骤。基底膜组成蛋白Nidogen的缺失将严重影响基底膜的完整性，有利于**细胞顺利通过进入血循环进而发生侵袭转移。有研究表明，Nidogen基因启动子在**细胞中表现出很高的甲基化水平，而在正常细胞中却极少或没有发生甲基化。另外，某些miRNA（如MiR-148a、miR-34b/c、miR-9）能够起到抑制**细胞生长和转移的作用，而在**细胞中，这些miRNA通常由于发生超甲基化而沉默。TBS具有高深度、定量、高准确性 。安徽TAB-SeqDNA甲基化欢迎咨询

5mc是表观遗传重要的一种修饰，存在于植物、动物等真核生物基因组中，被誉为“第五碱基”。江苏TBSDNA甲基化共同合作

miRNA的超甲基化：**细胞另一个重要的特点是miRNA表达水平的整体下降，通常也是由于miRNA启动子区域高甲基化造成的。这种miRNA表达失活不仅与**的发***展有关，而且与**的转移密切相关。如**细胞中miR-148a、miR-34b/c、miR-9这三种miRNA都发生了明显得超甲基化，同时外源表达这三种miRNA均可抑制**细胞的生长和转移。**发生是一个涉及多基因、多步骤的复杂过程，越来越多的研究表明DNA甲基化在**的发生、发展、转移中起到了重要的作用，特征性甲基化位点对于**的诊断、分型、预后及***具有重要意义。江苏TBSDNA甲基化共同合作