山东oxBSDNA甲基化方案

联合亚硫酸氢钠的限制性内切酶分析法（COBRA）：这种方法是将亚硫酸氢盐处理与酶切相结合来进行甲基化检测。DNA样本经亚硫酸氢盐处理后，利用PCR扩增。扩增产物纯化后用限制性内切酶（BstUI）消化。若其识别序列中的C发生完全甲基化(5mCG5mCG)，则PCR扩增后保留为CGCG，BstUI能够识别并进行切割；若待测序列中，C未发生甲基化，则PCR后转变为TGTG，BstUI识别位点丢失，不能进行切割。这样酶切产物再经电泳分离、探针杂交、扫描定量后即可计算出原样本中甲基化的比例。这种方法**的优点就是相对简单，可进行快速定量，且需要的样本量少。然而，它的局限性也十分明显，只能获得特殊酶切位点的甲基化情况，且阴性结果并不能排除样品DNA中存在甲基化的可能。在正常组织里, 70%到90%散在的CpG是被甲基修饰的。山东oxBSDNA甲基化方案

DNA甲基化（DNA methylation）是指在DNA甲基化转移酶（DNMT）催化下，以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体，将活性甲基转移至DNA链中特定碱基上的化学修饰过程。哺乳动物基因组中，DNA甲基化多发生在CpG二核苷酸中的胞嘧啶的5位碳原子。DNA甲基化是一种表观（epigenetic）修饰，它在不改变DNA序列的情况下，对个体的生长、发育、基因表达模式以及基因组的稳定性起到重要的调控作用，并且这种修饰在发育和细胞增殖的过程中是可以稳定传递的。近年来的大量研究表明，DNA异常甲基化与**的发生、发展、细胞*变有着密切的联系。浙江850K芯片DNA甲基化欢迎咨询WGBS技术及应用是有力方案。

虽然焦磷酸测序可以进行单个位点甲基化程度的精确定量，但是目前来看，测序的片段长度还比较短，只有一百多bp，其中有效长度约为60bp。以上是对几种常用的特异位点甲基化检测方法进行了介绍及比较，还有一些检测技术是在常用的检测手段上进行优化或者将不同的方法进行结合应用，比如以MSP方法为基础，发展了SMART-MSP技术，该技术利用定量技术对MSP扩增过程进行检测，同时后续结合HRM技术来分析甲基化差异。此外，利用质谱平台进行甲基化检测的有MALDI-TOF技术，可以对甲基化进行精确检测并能进行高通量筛选。从对这些技术的比较分析来看，没中检测技术都有各自的优点，并也存在一定的局限性，研究者可以根据自己的实际研究情况进行选择。在特异甲基化位点检测上，能够提供BSP、HRM及焦磷酸测序三种技术的完整的检测服务，具有丰富的经验，帮助客户加速甲基化研究进程。

羟甲基化DNA免疫沉淀测序（HydroxymethylatedDNAImmunoprecipitationSequencing，hMeDIP-Seq）是通过5hmC特异性抗体富集羟甲基化的DN**段，然后结合高通量测序技术在全基因组水平上以较小的数据量，快速、高效地寻找羟甲基化区域。可广泛应用于羟甲基化与疾病关系研究以及羟甲基化在胚胎发育过程中的研究。技术优势：从项目背景了解、协助方案设计、实验材料选取、建库测序，到数据分析每个项目有特定的科学问题；需要专业、有价值的建议；科学、缜密的设计及时高效的沟通；以保障高质量研究成果焦磷酸测序能提供杂合子缺失及细菌和病毒分型等技术服务。

重亚硫酸盐处理结合测序是目前检测甲基化的金标准。除了全基因组甲基化测序技术等研究手段，对于大样本量甲基化研究来说，更需要灵活、有针对性的技术方案。NGS-BSP方法适合几个到几十个基因或者位点进行大样本甲基化测序或者验证项目，具有更快速的实验周期及低成本优势。单碱基分辨率针对目标序列，非常灵活适合多种样本类型应用方向：450K/850K芯片筛选的差异甲基化CpG位点(DMS)。技术优势：高效灵活的目标区域甲基化检测的工具BSP和高通量测序完美结合，单碱基分辨率适合几个到几十个位点的大样本验证项目适合所有动物样本、周期快、检测位点灵活、性价比高。通过甲基化数据与耐药基因Panel数据联合分析。北京焦磷酸测序DNA甲基化售后服务

DNA甲基化是生物界神奇的“帽子”。山东oxBSDNA甲基化方案

相比于上述手段更为有效的策略是针对**相关*基因启动子低甲基化而进行的靶向甲基化***，包括DNA和RNA介导的甲基化***。1）DNA介导的DNA甲基化：DNMT1**适底物为带复制叉样结构的半甲基化DNA，据此Yao等设计了一段22nt的甲基化脱氧寡核苷酸MON1，MON1可以诱导IGF2启动子区域特定的胞嘧啶发生甲基化，体外实验证明其可抑制裸鼠肝脏**细胞生长，延长荷裸鼠存活期。2）RNA介导的DNA甲基化：双链RNA可以介导启动子区域DNA甲基化，从而抑制基因的转录表达。针对*基因启动子区域人工设计一段双链RNA分子，便可招募DNMT转移甲基使*基因沉默，抑制**细胞增殖，这一机制在乳腺*病例中已得到验证。另外，还可以通过人工介导上调DNMT或抑制DNA去甲基化酶实现**的甲基化***。目前，针对**的甲基化***出现不久，但已展现出良好的应用前景，针对这一领域的深入研究有望为临床预防和***提供高效低毒的抗**药物。山东oxBSDNA甲基化方案