生物病毒是一种个体及其微小的生物,甚至比、细菌还要小得多,必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖,是一种非细胞型生物。因此,不论是灭活型还是非灭活型,采样之后,病毒都是只能存活很短时间的。如果没有病毒保存液,病毒在体外几分钟就会大量降解。采样管主要是用于病毒核酸检测的,所以灭活型的保存液虽然使病毒裂解了,但是里面添加的RNA酶抑制剂可以保护其核酸,实验时只要能检测出核酸就可以作出诊断了。
影响病毒保存时间还有一个重要的因素,那就是温度。一般来说,灭活型的保存液由于只需要保护核酸不被降解,在4摄氏度保存一周,-20摄氏度保存一个月,-80摄氏度保存一年。非灭活的保存液在取样后如果不能及时检测,务必要4摄氏度低温保存,保存时间不超过48小时,如果无法及时送往检测点的需要-70摄氏度温度以下保存。 病毒保存液,对于很多小伙伴们而言,这个名词是新奇的,殊不知它对于各种病毒的检测具有重要的意义。山西病毒保存管病毒保存液平均价格
我们都知道病毒采样管用于、流感病毒、禽流感(H7N9等)、麻疹等病毒标本、支原体、衣原体标本的采集、保存和运输。
因为采集的样品质量直接关系到后续的检查,如果使用不好的采样拭子和病毒保存液,那采集的样本病毒含量不高,随着生存的微小环境的变化,阶段性发生分解,很容易影响到检测结果,难以确定诊断或者容易发生误诊等。因此,通过采用专业的病毒采样管,这样才可以保障样品的有效性,减少病毒假阴性和误诊!
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市场上使用的病毒保存液主要有两种,一种是以运送培养基为基础改良的病毒维持液,另一种则为核酸提取裂解液改良的保存液。
前者的主要成分是Eagle's基础培养液(MEM)或Hank's平衡盐,添加了病毒生存所需的盐类、氨基酸、维生素、葡萄糖以及蛋白质,这种保存液使用酚红钠盐做为指示剂,溶液pH值在6.6-8.0时溶液呈粉红色。保存液中添加了必须的葡萄糖、L-谷氨酰胺和蛋白质,蛋白质的提供形式有胎牛血清或牛血清白蛋白,可以稳定病毒的蛋白质外壳。由于保存液营养成分丰富,有利于病毒的成活但是也有利于细菌的生长,如果保存液中污染了细菌,则会大量繁殖,其代谢产物中的二氧化碳会使保存液pH值下降,从粉红色变为黄色。因而大多数厂家都在配方中添加了抑菌剂成分,推荐使用的抑菌剂为青霉素、链霉素、庆大霉素及多粘菌素B等,不推荐使用叠氮钠、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MCI)和
5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMCI)等抑制剂,因为这些组分对PCR反应有影响。由于这种保存液提供的样本基本是活病毒,可以很大程度保持样本的原始性,后续不仅可以用于病毒的核酸提取检测,还能用于病毒的培养和分离。但是用于检测时应该注意的是必须灭活以后再进行核酸提取纯化。
我们除了以上介绍的灭活型的病毒保存液外,还有非灭活的病毒保存液。含有Hank's液体、氯化钾、氯化镁、氯化钙、BSA等。多种联合,具有抗细菌和抗的作用;牛血清蛋白(BSA)作为蛋白稳定剂,可在病毒的蛋白质外壳形成一种保护膜,使其不易分解,保证病毒的完整性;Hank's缓冲剂构建的中性环境,有助于增加病毒的生存时间和稳定性。灭活型和非灭活型病毒保存液通常用于临床流感、禽流感、手足口病毒、麻疹等病毒标本及支原体、脲原体、衣原体等标本的采集和运送。可以进行2~8天的短期储存和运输,在-70℃或液氮环境中长期储存。
灭活型病毒保存液的原理:
主要是核酸提取裂解液改良的病毒裂解型保存液,里面添加有高浓度的裂解盐,能够迅速高效地使待测样本利的病毒蛋白裂解失活,可以有效防止操作员二次,同时又含有Rnase酶抑制剂,能保护病毒核酸不被降解,后续的实验只要能检测出病毒的核酸即可以做出诊断。而且能在常温下保存相对较长的时间,节省了病毒样品保存以及运输的成本。
非灭活型病毒保存液的原理:
它同时保留了病毒的蛋白质外壳以及病毒核酸DNA或者RNA,这样就可以保证病毒样本核酸在送检过程中的完整性,虽然操作失误时会也有一定的性风险,但是这种保存液很大程度地保持了病毒样本的原始性,是一种培养型的病毒运输介质,需要注意的是采样后长时间保存需要保持严格低温保存。
使用灭活型保存液的目的是裂解核酸,释放核酸然后通过后续的实时荧光RT-PCR进行核酸检测。山西灭活病毒保存液价格实惠
主要是以运送培养基为基础改良的病毒维持型保存液。它能够保持病毒在外的活性以及抗原和核酸的完整性。山西病毒保存管病毒保存液平均价格
非灭活型:不含裂解盐,但是保存的病毒完整性更好,检出率更高,除了核酸检测外还可以用于其他研究。非灭活的病毒保存液,具有抗细菌和抗的作用;牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质稳定剂,可在病毒的蛋白质外壳形成一种保护膜,使其不易分解,保证病毒的完整性;Hanks缓冲液构建的中性环境,有助于增加病毒的生存时间和稳定性。非灭活的病毒保存液通常用于临床流感、禽流感(如H7N9) 、手足口病、麻疹等病毒标本及支原体、脲原体、衣原体等标本的采集及运送。山西病毒保存管病毒保存液平均价格
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