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    焦磷酸测序（Pyrosequencing）技术服务基于QIAGEN公司的PyroMarkQ96ID平台，能提供基于序列测定的SNP检测、等位基因频率分析和甲基化检测，杂合子缺失及细菌和病毒分型等技术服务。样品要求·样品类型细胞、新鲜组织或DNA样品·样品量细胞样品请提供至少1×106个细胞，组织样品请提供至少100mg的组织块或切片，DNA样品请提供1μg以上的DNA·样品质量基因组DNA无明显降解，主带清晰，大于23Kb，无明显弥散。OD260/280值在～，浓度≥50ng/μl·样品保存细胞样品或新鲜组织块（切成～50mg的小块）可液氮冻存后，-80℃保存。DNA样品可溶于乙醇或超纯水中，-80℃保存。样品保存期间避免反复冻融·样品运输样品置于ml冻存管中，封口膜封好，干冰运输。 提供样本DNA完整性质检结果。浙江技术服务活动

DNA甲基化作为表观遗传学研究的重要范畴，已经越来越受到研究者的关注。近些年来，随着DNA甲基化与组蛋白甲基化的联合作用机制、RNA干扰机制及去甲基化机制的发现，使得DNA甲基化研究受到***关注，从医学领域扩展到动植物研究当中，同时在研究方法上也取得了很大的突破。现在用于DNA甲基化检测的方法大概有十多种，从应用上来分，大致可以分成两类：全基因组甲基化分析及特异位点甲基化检测。下面，我们就这两大类检测技术进行分析比较，以便于在实际的科研工作中进行选择。广东WGBS技术服务口碑推荐TBS具有高深度、定量、高准确性 。

Hepatic

stellate cell transdifferentiation involves genome-wide remodeling of the DNA

methylation landscape. J Hepatol. 2016;64(3):661-73. (IF= 14.911)

肝星状细胞(HSC)是导致肝纤维化发生和进展的关键细胞类型。DNA羟甲基化与转录***有关，其模式在人类疾病中经常发生改变。研究者采用简化基因组氧化-亚硫酸盐测序(RRBS/oxRRBS)检测静止和******状态的大鼠HSC细胞的5mC和5hmC水平，证实了5mC和5hmC在肝纤维化和HSC转分化过程中的整体变化，表明DNA甲基化/羟甲基化是HSC***的关键步骤，可能会为支持纤维生成的分子事件带来新的见解，并可能为疾病进展提供生物标志物以及潜在的新药物靶点。

技术优势

1、ChIP-Seq 能实现真正的全基因组分析。目前所能获得的芯片上固定的探针只能**全基因组部分序列，所获得的杂交信息具有偏向性。

2、对于结合位点分析，ChIP-Seq 通过寻找“峰”，结合分辨率可精确到10~30 bp，而芯片上探针由于长度所限，无法精确定位，即使目前比较高水平的商业芯片都无法提供可与ChIP-Seq 媲美的分辨率。

3、是所需样本数量。ChIP-chip 需要多达4~5 μg?的起始样本，在杂交之前需要进行LM-PCR，但可能导致背景增高，竞争性扩增等导致假阳性。而ChIP-Seq *需要纳克级起始材料，如SOLiD 起始材料可低至20ng。 不同的芯片平台，各自的实验过程也是不一样的。

    甲基化-焦磷酸测序（升级版）之前的仪器是Q96，也就是说同时可以上96个反应，但是有效读长只有50bp左右（50bp之后开始衰减，后面的序列只能作为参考）；升级版的Q48，也就是48孔，每次上48个反应，但有效长度可以到100bp左右，而且之前很多不能测过去的特殊结构，现在大部分也能测了。甲基化--------焦磷酸测序的优势。样品要求·样品类型细胞、新鲜组织或DNA样品·样品量细胞样品请提供至少1×106个细胞，组织样品请提供至少100mg的组织块或切片，DNA样品请提供1μg以上的DNA·样品质量基因组DNA无明显降解，主带清晰，大于23Kb，无明显弥散。OD260/280值在～，浓度≥50ng/μl·样品保存细胞样品或新鲜组织块（切成～50mg的小块）可液氮冻存后，-80℃保存。DNA样品可溶于乙醇或超纯水中，-80℃保存。样品保存期间避免反复冻融·样品运输样品置于ml冻存管中，封口膜封好。 基于高通量测序平台的甲基化图谱分析。江苏TBS技术服务服务

全基因组甲基化分析及特异位点甲基化检测。浙江技术服务活动

    6mAIP-Seq送样要求一、送样类型基因组DNA、动植物组织(包含藻类等)二、保存方式基因组DNA、动植物组织(包含藻类)：放-20℃冰箱中保存，或者放-80℃冰箱中长期保存(1年以内)；保存期间避免反复冻融。三、运输条件1、基因组DNA：冰袋或者干冰运输；2、植物组织(包含藻类)：干冰运输，顺丰陆运（3-4天时间），夏季10-15公斤干冰；秋冬季10公斤干冰；四、样本量要求1、基因组DNA：不少于6ug1）提供样本DNA完整性质检结果，例如琼脂糖凝胶电泳或者Agilent2100电泳等；2）提取基因组DNA，要加RNA酶，去除RNA污染;3）提取基因组DNA，溶到TE或者elutionbuffer,避免溶解到纯水；样本体积不超过100ul;4）提供Qubit检测浓度，基于OD值的检测方法，例如NanoDrop,会严重高估浓度。2、植物组织(包含藻类)：1g以上;植物组织，不同组织，送样量不同植物组织：从植物体上，取下新鲜组织，用清水将材料表面的灰尘或泥土冲洗干净，吸干；取不少于1g叶片等组织，对于果实等含糖很高的组织，送样前需要咨询技术人员。3、动物组织：30mg以上用预冷的1×PBS溶液洗掉组织表面残留的血液；取不少于30mg（1/2绿豆大小）组织块，放置-20℃冰箱中保存，或者放-80℃冰箱中长期保存(1年以内)。 浙江技术服务活动