上海核酸拷贝数定量数字PCR

肺*的EGFR突变检测：EGFR突变目前已成为非小细胞肺*（Non-Small-Cell Lung Cancer，NSCLC）患者常规的伴随诊断，对于EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TKI）的使用具有重要的指导作用。然而，由于多数NSCLC都处于晚期，很难取到足够的**组织完成该检测，不方便对患者的疗效和耐药情况进行动态监测。相反，血液、胸水以及脑脊液之类的体液标本中会含有**来源的DNA（Circulating tumor DNA，ctDNA），它们更容易获取，被认为是组织标本的有效替代品。由于体液标本中ctDNA的含量非常低，因此对检测方法提出了很高的要求。近年来，有研究者证实，数字PCR的检测敏感性可以低至0.04%，EGFR突变的血浆检测与组织学检测能够有很好的吻合性，相比于传统的检测方法，数字PCR可以***提高血浆中EGFR突变的检出率。此外，利用数字PCR***定量的优势，可以对血浆中EGFR突变的丰度进行动态监测，这种动态变化与患者使用TKI的疗效密切相关，可以更好的指导患者的***。随着越来越多循证医学证据的出现，NSCLC的血液EGFR突变检测正在成为ddPCR相当有前景的应用方向。不受扩增效率的影响，也不必采用看家基因和标准曲线。上海核酸拷贝数定量数字PCR

ddPCR主要有Bio-rad公司开发的QX200系统和Rain Drop系统，QX200可以将体系分割成2万个微滴，Rain Drop可以分割成100万-1 000万个微滴。ddPCR原理是通过将一个待分析的PCR反应体系进行微滴化处理，利用微滴发生器制成近20 000个油包水小微滴从而对原始体系进行分割，样品中的核酸分子随机分配到大量**的微滴中，每个微滴中含有一个或不含待检核酸分子。对微滴体系进行扩增反应以后，分析每个微滴的荧光信号，进行有或无的判断，将判断结果按照泊松分布的原理，通过读取靶标和内参核酸的阳性微滴个数以及比例从而得到靶分子的拷贝数及浓度。与芯片式dPCR相比，操作简单，可以实现高通量的检测，也保证一定程度上的微滴检测稳定性。天津拷贝数变异数字PCR方案可以用来检测外泌体micRNA。

微生物（病毒、细菌等）的检测：疾病预防控制中心、出入境检验检疫局系统的实验室可以将基于TaqMan探针法的定量PCR体系无缝地转移到数字PCR上，从而满足该类实验室对于检测结果的要求：灵敏度更高、重复性更好、无需依赖标准曲线的***定量结果。其他应用：数字PCR还可以用于转基因成分的检测、移植排斥监控、肠道菌群分析以及药物基因组检测等领域。随着数字PCR荧光通道的增加和多指标检测的成熟，数字PCR将会进入更多应用领域，有力推动生命科学、医学诊断、检验检疫、农业等领域的快速发展。

优势：不依赖Ct值，无需标准曲线，即可实现真正的***定量高精确度、高灵敏度，荧光定量qPCR灵敏度为1%-0.1%，数字化PCR灵敏度可达0.01-0.001%。对干扰分子（背景信号、PCR抑制剂等）耐受度高，通过信号的“有”“无”定量而不是Ct值。数字PCR研究基因表达遇到基因丰度非常低的，或者样本浓度低的，可以选择数字化PCR，通常CT值大于30的时候，荧光定量qPCR的精确度和重复性会**降低，这个时候可考虑数字化PCR。外泌体里面的micRNA含量是非常低的，提取外泌体也是个非常费时费钱的事情，千辛万苦提取出来的样本，保险起见，用数字化PCR是非常不错的一个选择，而且也非常便宜。微反应单元体积大小一致且稳定是泊松分布准确计算的前提。

*****的实时监控：已有数篇文章报道了使用数字PCR技术对患者***过程中的循环**DNA（ctDNA）进行检测，实时监控疾病进展。在非小细胞肺*、乳腺*和肠*等多种**患者中都取得了令人鼓舞的结果。与影像学及其他常规指标相比，ctDNA突变及丰度改变通常会提前数月出现，这样就可以提醒医生及时调整***方案，使患者得到更有效的***。无创产前筛查：唐氏综合征、地中海贫血或胎儿遗传性耳聋基因检测等，目前无创检测标本来源主要为孕妇血液，检测胎儿DNA会受到母体DNA的干扰，依靠数字PCR可提高检测准确性。对比NGS，数字PCR技术可以提高工作效率、降低检测成本。外泌体里面的micRNA含量是非常低的。PCR数字PCR怎么样

对干扰分子（背景信号、PCR抑制剂等）耐受度高，通过信号的“有”“无”定量而不是Ct值。上海核酸拷贝数定量数字PCR

***代PCR技术是常规PCR技术，对目的基因扩增后进行凝胶电泳，将扩增条带与已知浓度的标准品比较，得到定性结果，但在产物分析时需要开盖操作，容易引起交叉污染，导致假阳性。第二代PCR技术是在PCR反应体系加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR反应进程，通过相关数据分析方法对目的基因进行定量分析的技术。数字PCR是第三代PCR技术，是一种采用微流控或微滴化的方法将稀释后的待测样品核酸溶液分散至微反应器或微滴中再在相同条件下进行单分子PCR，检测每一个微反应器或微滴中荧光信号通过直接计数或泊松分布修正得到原始浓度或含量的核酸分子***定量技术。目前大致可分为三类：微反应室/孔板数字PCR、大规模集成微流控芯片数字PCR、液滴数字PCR。上海核酸拷贝数定量数字PCR