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PCR是一种具有选择性的体外扩增DNA的片段的方法。其特异性由两个人工合成的引物DNA序列决定。所谓引物是指与待扩增核酸片段两端互补的寡核苷酸,其本质是ssDNA(单链DNA)的片段。指在引物指导下由酶催化的对特定模板(克隆或基因组DNA)的扩增反应,是模拟体内DNA复制过程,在体外特异性扩增基因片段的一种技术,在分子生物学中有普遍的应用,包括用于DNA作图、DNA测序、分子系统遗传学等。CR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。pcr检测实验多久出结果?新疆细胞pcr扩增

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PCR反应的特异性强,其决定因素为:①引物与模板DNA特异正确的结合;②碱基配对原则;③TaqDNA聚合酶合成反应的忠实性;④靶基因的特异性与保守性。其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性明显增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。江西高质量pcr检测RTpcr和pcr的区别是什么?

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PCR实验技术中的兼并引物PCR(DegeneratePrimer)介绍:兼并引物是指代替编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。兼并度越低,产物特异性越强。设计引物时应尽量选择兼并性小的氨基酸,并避免引物3’末端兼并,因为3'端末尾3个碱基的退火足以在错误位点起始PCR;次黄嘌呤可以同所有的碱基配对,降低引物的退火温度。因此,在引物设计时,比较选择兼并性小的氨基酸,并避免引物3'端被兼并,因为3'端末尾3个碱基的退火足以在错误位点起始PCR;次黄嘌呤可以同所有的碱基配对,降低引物的退火温度。实验证明,用脱氧肌苷引物进行PCR,可以代替编码蛋白的多种兼并密码子中的兼并碱基。

PCR实验技术中的免疫-PCR(immuno-PCR)介绍:免疫-PCR(immuno-PCR)是新近建立的一种灵敏、特异的抗原检测系统。它利用抗原-抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性来检测抗原,尤其适用于极微量抗原的检测。免疫-PCR试验的主要步骤有三个:①抗原-抗体反应,②与嵌合连接分子结合,③PCR扩增嵌合连接分子中的DNA(一般为质粒DNA)。该技术的关键环节是嵌合连接分子的制备。在免疫-PCR中,嵌合连接分子起着桥梁作用,它有两个结合位点,一个与抗原抗体复合物中的抗体结合,一个与质粒DNA结合,其基本原理与ELISA和免疫酶染色相似,不同之处在于其中的标记物不是酶而是质粒DNA,在操作反应中形成抗原抗体-连接分子-DNA复合物,通过PCR扩增DNA来判断是否存在特异性抗原。免疫PCR优点为:①特异性较强,因为它建立在抗原抗体特异性反应的基础上。②敏感度高,PCR具有惊人的扩增能力,免疫PCR比ELISA敏感度高105倍以上,可用于单个抗原的检测。③操作简便,PCR扩增质粒DNA比扩增靶基因容易得多,一般实验室均能进行。做pcr检测,需要注意哪些事项?

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PCR实验技术中的不对称PCR(AsymmetricPCR)介绍:不对称PCR的基本原理是采用不等量的引物产生大量的单链DNA(ss-DNA)。这两种引物分别称为限制性引物与非限制性引物;其比较好比例一般为1:50~1:100,关键是限制引物的量。限制性引物太多太少,均不利于ss-DNA.不对称PCR反应过程:一般来说,在不对称PCR反应中,在开始的20-25个循环中,两个比率不对称的扩增引物产生出双链DNA,当限量的那个引物耗光后,随后的5-10个循环就产生出ssDNA.产生的ds-DNA与ss-DNA由于分子量不同,可以通过电泳分离。pcr检测实验数据如何分析?甘肃什么是pcr怎么样

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PCR实验技术中的快速PCR(FastPCR)介绍:在快速PCR中,通过缩减PCR步骤所需的时间来完成更快的扩增,而不影响扩增产量和效率。快速循环条件尤其适用于均有高扩增能力的DNA聚合酶,这种聚合酶在每次结合中可引入更多的核苷酸。高扩增能力的聚合酶可保持高扩增效率,而PCR延伸时间是Taq聚合酶(低扩增能力)延伸时间的1/2到1/3(图4)。通过将引物退火和延伸(如果温度只相差几度)合并成一步,PCR反应时间可进一步缩短。这个方案也被称为两步PCR方案。新疆细胞pcr扩增

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