免疫定量试剂盒只有贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的进程,因而需经扩散才能到达反响的结尾。在这以后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。37℃是实验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体结合的适宜温度。在建立方法作反响动力学研究时,实验表明,两次抗原抗体反响一般在37℃经1~2小时,产品的生成可达高峰。为加快反响,可进步反响的温度,有些实验在43℃进行,但不宜选用更高的温度。试剂盒吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。海南免疫组化试剂生产
试剂盒温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加彻底。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。底物是光敏感的,要在临用前现配。检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。待检样品要澄清,否则会影响结果。温浴时间应遵守试剂盒规定。应尽量做双孔实验,这样才能保证数据的准确性。对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。天津PCT试剂生产ELSIA操作步骤复杂,影响反应因素较多。
试剂盒如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。标本较多时,请分批操作。可能原因:孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗彻底;孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。解决办法:贴封片或加盖;按说明步骤严格控制操作时间。洗板试剂盒可能原因:采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不彻底;洗板针堵塞,抽吸不完全;洗板不畅,导致洗板效果差。
检测试剂盒的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。可用于测定抗原,也可用于测定抗体。然而,影响检测试剂盒试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。试剂盒以阳性对照与阴性对照控制试验条件。
试剂盒双向分散法:使用大分子抗原和抗体在琼脂平板上分散,两者在相交处发生沉积线,以调查和判别抗血清中是否有抗体及其浓度。球脂板的制备:100mlpH7.1的磷酸盐缓冲液加到15g的琼脂内,于水浴中加温,搅拌,使琼脂彻底溶解,趁热用纱布过滤,待溶液冷却到65℃左右时,参加叠氮钠,使其在溶液中的浓度为0.1%。用移液管把琼脂放在洁净平皿或玻片上,约3mm厚,待其冷却,彻底凝固后,用打孔器打孔。中心孔内加适量抗原,周围各孔内分别参加50μl1:2、1:4、1:8、1:16、1:32及不稀释的抗血清,37℃下孵育24h,调查有无沉积线发生,以判别血清的稀释度。试剂盒进行各项实验条件的选择是很重要的。浙江降钙素原试剂特点
试剂盒吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;海南免疫组化试剂生产
试剂盒每加一种试剂前需将其摇匀。在加入底物液A液和底物液B液后,一般显色时间为15~20min即可。若颜色较浅,可延长反响时间到30min。反之,则减短反响时间。反响停止液为2M硫酸,防止接触皮肤。不要运用过了有用日期的试剂盒;也不要运用过了有用期的试剂盒中的任何试剂,掺杂运用过了有用期的检测试剂盒会引起灵敏度的降低;不要交流运用不同批号试剂盒中的试剂。当然除了注意以上几点外,选对试剂盒也很关键,可以很大降低实验危险性。海南免疫组化试剂生产