外泌体基本参数
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外泌体企业商机

l 纳米颗粒追随分析法:简称NTA,该方法能保证外泌体原始状态、检测速度快,检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。l Western blot分子标志物检测:外泌体标志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;细胞质蛋白,如肌动蛋白(Actin)和钙磷脂结合蛋白(Annexins);参与生物功能的分子,如凋亡转接基因2互作蛋白X(ALIX)、种瘤易感基因101蛋白(TSG101)、热休克蛋白(HSP70、HSP90),以及细胞分泌的特异性蛋白。外泌体内含有与细胞来源相关的蛋白质和核酸,可以运输蛋白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等进入受体细胞,参与细胞间通讯。不同细胞来源的外泌体所含有的蛋白成分和RNA不太相同,可作为多种疾病的早期诊断标记物,也能作为靶向药物的载体进行疾病医治。外泌体是内源性和质膜起源的不同类型的膜囊泡。湖南组织外泌体small RNA测序

为了解决外泌体实验遇到的上述的各种问题, Wako 研发出MagCapture™外泌体提取试剂盒PS(MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS)提取高纯度细胞外囊泡。外泌体膜含有分泌细胞源的蛋白和脂质,众所周知磷脂酰丝氨酸(PS)在活细胞通过翻转酶作用导向细胞膜内侧,暴露在外泌体膜外侧3)。另外,T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4(Tim4 通过巨噬细胞进行细胞凋亡的吞噬受体)蛋白通过细胞外域IgV域与含有钙离子的PS结合4)。基于上述知识,我们利用Tim4固化磁珠,在钙离子存在下捕捉培养上清和血清等样品中的外泌体,再添加螯合剂洗脱外泌体,这种外泌体纯化方法是和金泽大学医学系免疫学华山教授共同开发,并取得了成功。5)这是迄今为止取代黄金标准超速离心法的新型外泌体纯化方法。河南血浆外泌体染色PKH67/PKH26因外泌体内含mRNA、microRNA等核酸和蛋白质对相邻细胞具有交换信息的功能。

外泌体有很多潜在优势,但是外泌体在药物递送中的应用研究才刚刚起步,尚有许多问题需解决:如何修饰外泌体的靶向性:缺氧瘤细胞来源的外泌体倾向于向缺氧瘤组织内募集;此外,还可通过在外泌体膜表面设计与靶细胞特异性结合的抗体、配体或受体来实现。如何提高药物装载效率:目前主要有①前装载方法(首先将药物加载到母细胞中,随后外泌体形成并包裹药物分泌到细胞外,常用的方法如转染、共孵育等);②后装载方法(直接将药物加载到外泌体中,例如孵育、电穿孔、超声、挤出、冻融循环等);③其他装载方法(主要是通过生物工程修饰母细胞来实现)。如何实现外泌体的大量生产:目前大规模生产外泌体的方法主要是自发生产和非自发生产。

全自动外泌体荧光检测分析系统能够在单个外泌体样本上检测多达4种标记物,并同时提供外泌体的其它表征数据诸如计数、颗粒尺寸统计等。建议在表征外泌体和外囊泡时,应当同时测量表面和载体蛋白。使用ExoView芯片可穿透外泌体,探测膜内蛋白和载体。并且单次可定量3种表面、管腔蛋白。全自动外泌体荧光检测分析系统只测量含有靶标抗原的特定细胞外泌体群体。只需35 μL的稀释样品,即可直接获得外泌体的表型、粒径和计数信息。并且无需担心污染物对测试的影响。外泌体中含有丰富的蛋白质和遗传物质DNA以及RNA等。

干细胞外泌体可直接促进血管生成,改善大脑缺氧后的损伤。因此,干细胞外泌体可用于中风的治理,改善神经预后,增加血管与神经生成。干细胞外泌体对多种类型的免疫细胞均具有免疫调节作用,包括树突状细胞、T细胞、B细胞和巨噬细胞。静脉输注干细胞外泌体可抑制CD4+T和CD8+T细胞的活化和浸润,从而延长GVHD小鼠模型的存活时间,并减少多个组织的病理损伤。干细胞在人类健康领域所发挥出来的潜能,令人惊叹。而干细胞外泌体,作为干细胞与其它组织细胞相互交流信息的载体,俨然会成为生物医学研究的新风口之一。外泌体具有良好的生物兼容性、稳定性和内在靶向性,使其在药物递送方向大有潜力。辽宁细胞外泌体示踪

外泌体的检测和提取还遇到一个困难即:对各种外泌体的分类。湖南组织外泌体small RNA测序

近年来众多文献报道,肺病细胞分泌的外泌体中富含多种蛋白质并促进肺病的发发展,是早期诊断肺病的有效途径。有研究发现,NSCLC患者肺组织外泌体表面EGFR免疫染色呈阳性的占80%,而慢性肺炎组织的外泌体EGFR呈阳性的只占2%,因而认为外泌体的EGFR蛋白可以用作NSCLC与慢性肺炎鉴别诊断的生物标志物。Park等通过Sys-BodyFlu-id数据库分析发现153种特异性胸腔积液外泌体蛋白质,进一步的Western blotting分析显示多种特异性胸腔积液外泌体蛋白参与EGFR信号传导途径以促进种瘤的发发展,因此外泌体蛋白可能作为肺病诊断筛查的生物学标记物。湖南组织外泌体small RNA测序

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