人类的病毒性传染很普遍,病毒可以通过呼吸道、消化道、皮肤等多种途径进行传播,常常会导致严重的公共健康问题,对人类的健康造成威胁。传统的病毒检测方法主要依赖于细胞培养法、抗原抗体结合法等,这些方法耗时久,灵敏度低,往往不能够满足临床检测需求。随着分子生物学的发展,PCR方法用于病毒检测的案例越来越多,但该方法的特异性限制了其同时检测其它病毒的能力。因此,需要通过新的技术来实现。随着二代测序技术成本的降低与普及,二代测序在临床病原体检测方面的优势也越加突显。该技术基于二代测序平台,可以直接从样本中获得病原体的核酸序列信息,再通过生物信息学的方法对得到的序列进行分析,可以快速地对样本中可能存在的全部病原体进行鉴定,缩短了临床检测的周期。病毒是由一种核酸分子与蛋白质构成或只由蛋白质构成。RNA深度测序进化分析排行
病毒基因组测序是疾病诊断、流行病学调查和宿主-病原关系研究的重要手段。病毒的全基因组测序以及对应的生物信息学分析方法是研究病毒进化、毒力因子变异、疫病爆发之间的关系、疫病传播途径、不同遗传变异的分布模式、疫病发生地理区域的基础。与传统Sanger测序相比,NGS技术的发展使得一个小的研究小组可以拥有大量病毒株的全基因组序列,测序成本也在逐步降低。由于NGS产生的数据量非常庞大,其序列拼接难度也随之增加。而且对于低浓度高复杂度的样本,研究者除了PCR外别无他法。而PCR方法往往具有偏好性,丢失的片段将为序列组装带来非常高的失败率。对于完全未知的样本,无法通过PCR进行富集,要鉴定其种类需要调用各种方法,逐个尝试,工作量之大,其效率之低,使得一个新的研究方法的出现及其必要。RNA深度测序分析检测病毒全基因组测序具有的特点:无需培养和特异性扩增,对采集临床样本直接检测。
病毒全基因组测序定:探普生物对病毒的全基因组进行测序的实验基于二代测序技术。样本经过核酸纯化-文库构建-生物信息学分析这3大基本流程后转换成了序列数据。先,在核酸纯化环节,探普提供专门针对性的核酸纯化样本指南,以提高目的物种的核酸纯度和得率,与此同时探普生物也提供核酸纯化服务。第二,文库构建环节,样本的核酸具备浓度低,总量少的特点。探普生物专门针对这一点开发了超微量核酸文库构建,可以将0.01ng/μl甚至更低浓度的核酸构建成测序文库。第三,生物信息学分析环节。生存环境和状态决定了对病毒的全基因组进行测序的下机数据一般都伴随大量的宿主和其他微生物的数据。探普生物基于该特点,优化了自有数据库,搭载了专门用的的生物信息学分析流程,可处理复杂背景下的目标物种序列。
第二代测序技术的应用:第二代测序技术(NGS)因其快速和灵敏的检测特点已成为植物病毒学研究的强有力工具,这一技术具有非序列依赖性的优势,能同时检测植物样品中可培养和不可培养的、含量高及含量低的所有的DNA病毒、RNA病毒以及类病毒,它的出现极大地变革和推进了病毒的发现历程,近期来自浙江大学生物技术研究所等处的研究人员围绕NGS及其在植物病毒发掘中的应用研究和前景进行概述和展望。对分离培养和临床标本的病毒核酸的测序实验及分析流程。基于无差别的样本处理方式和独特的生物信息学分析流程,除了对于被宿主核酸污染的病原微生物/病毒核酸样本进行全基因组和宏基因组测序之外,未知病原也在探普特有的流程下可以得以鉴别。病毒全基因组测序要注意什么事项?
RNA病毒基因组测序工作:动物、人、植物被特定病毒株侵染、分离到病毒株、连续传代的病毒株往往都需要获得尽量完整的基因组序列来指导下一步的研究,传统的sanger测序需要了解序列、设计引物、做很多PCR,往往效率很低,而NGS作为一种无需特异性引物扩增的测序方式,可以直接从RNA中获得序列。如果,1,您的目的是:获得一种指定RNA病毒尽量完整的序列;2,您可以提供该病毒的中英文名称;3,您了解样本中病毒的载量情况、培养状况、ct值等任一信息。那么,RNA病毒基因组测序可以帮助你,探普为你准备了完整的下单、样本准备方法。目前对病毒溯源分型主要检测手段就是高通量测序技术。DNA病毒测序进化分析诊断
病毒全基因组测序产品特点:结果稳定可靠。RNA深度测序进化分析排行
高通量基因组测序中,测序深度和覆盖度指的是:测序深度是指测序得到的总碱基数与待测基因组大小的比值。假设一个基因大小为2M,测序深度为10X,那么获得的总数据量为20M。覆盖度是指测序获得的序列占整个基因组的比例。由于基因组中的高GC、重复序列等复杂结构的存在,测序终拼接组装获得的序列往往无法覆盖有所的区域,这部分没有获得的区域就称为。例如一个细菌基因组测序,覆盖度是98%,那么还有2%的序列区域是没有通过测序获得的。RNA深度测序进化分析排行
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