真核生物基因表达受多种机制、多层面的综合调控。基因的DNA序列不发生改变的情况下,基因的表达水平与功能发生改变,并可遗传现象,称为表观遗传(epigenetic)现象。DNA甲基化是指在甲基转移酶的催化下,DNA的CG二核苷酸中的胞嘧啶被选择性的添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,常见于基因的5′—CG—3′序列。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非编码区,DNA高度甲基化首先会影响DNA结构,进而阻遏基因转录,引起基因沉默。人体内,DNA甲基转移酶主要有四种:DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L。在DNA复制完成后,DNMT1是催化甲基转移至新合成的DNA链上,这一现象称为维持甲基化;DNMT3A和DNMT3B负责催化核酸链上新的甲基化位点发生反应,成为形成甲基化;DNMT3L不具有甲级转移酶活性,其主要作用是调节其他甲基转移酶的活性。真核细胞内甲基化状态有3种:持续的低甲基化状态(如持家基因的甲基化)、诱导的去甲基化状态(如一些发育阶段特异性基因的修饰)和高度甲基化状态(如人类女性细胞内缢缩-失活的X染色体的甲基化)。全基因组DNA甲基化测序是用 Bisulfite 处理DNA序列。安徽目标区段甲基化重测序公司
DNA 甲基化是早发现的基因表观修饰方式之一,可能存在于所有高等生物中。DNA 甲基化能关闭某些基因的活性,去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。甲基化的主要形式有5-甲基胞嘧啶,N6-甲基腺嘌呤和7-甲基鸟嘌呤。原核生物中CCA/TGG和GATC常被甲基化,而真核生物中甲基化发生于胞嘧啶。DNA 的甲基化是在DNA 甲基化转移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5'端的胞嘧啶转变为5'甲基胞嘧啶。这种DNA 修饰方式并没有改变基因序列,但是它调控了基因的表达。北京目标位点甲基化重测序哪个公司做表观遗传学研究已经证实了特定基因区域的DNA甲基化修饰对于染色体构象、基因表达调控机制有着重要影响。
DNA甲基化是一种重要的表观遗传学标记,在调控基因表达、细胞的分化与发育等过程中发挥着关键作用。使用基于重亚硫酸氢盐测序的方法进行DNA甲基化评估:首先用亚硫酸氢盐处理基因组DNA可将未甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶(黄色字母),而甲基化胞嘧啶保留为胞嘧啶(白色字母);然后进行两轮PCR:first轮PCR分别放大每个样本的每个区域,并添加8个随机核苷酸(N8)用于重复数据消除和适配体序列;在汇集每个生物样本的扩增子后,第二轮PCR完成带有样本barcode的序列库,用于多样本NGS测序。
DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而控制基因+表达。在甲基转移酶的催化下,DNA的CG两个核苷酸的胞嘧啶被选择性地添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,这常见于基因的5'-CG-3'序列。大多数脊椎动物基因组DNA都有少量的甲基化胞嘧啶,主要集中在基因5’端的非编码区,并成簇存在。甲基化位点可随DNA的复制而遗传,因为DNA复制后,甲基化酶可将新合成的未甲基化的位点进行甲基化。DNA的甲基化可引起基因的失活。重亚硫酸盐扩增子测序法基于非甲基化胞嘧啶(C)向尿嘧啶(U)的化学转化,即用重亚硫酸盐处理基因组DNA。
目标区域甲基化重测序(Hi-MethylSeq),又叫重亚硫酸盐扩增子测序(Bisulfite Amplicon Sequencing, BSAS)。在前期全基因组甲基化测序、全基因组甲基化芯片等工作基础上,或者依据文献报道目的基因甲基化与性状/疾病关联,选择感兴趣的目的区间或候选基因,利用Hi-MethylSeq技术对大规模群体的候选基因甲基化水平进行检测。Hi-MethylSeq技术通过亚硫酸氢盐(bisulfite)处理,用多重PCR扩增目的片段,添加barcode和测序通用接头,在Illumina X10二代测序平台对PCR产物进行高通量测序,利用生物信息学方法,精确定量计算目标区间内的甲基化位点的甲基化状态,在完成目标区域检测的同时大幅降低研究费用。DNA甲基化测序可在全基因组水平上比较大限度的、完整的获取甲基化状态信息和与基因表达调控的多重关系.北京亚硫酸盐甲基化重测序
异常的DNA甲基化可参与调控疾病相关的分子信号通路,从而影响其正常功能。安徽目标区段甲基化重测序公司
WGBS能为基因组DNA甲基化时空特异性修饰的研究提供重要技术支持,能广泛应用在个体发育、衰老和疾病等生命过程的机制研究中,也是各物种甲基化图谱研究的优先方法。常规全基因组甲基化测序技术通过T4-DNA连接酶,在超声波打断基因组DNA段的两端连接接头序列,连接产物通过重亚硫酸盐处理将未甲基化修饰的胞嘧啶C转变为尿嘧啶U,进而通过接头序列介导的 PCR 技术将尿嘧啶U转变为胸腺嘧啶T。上海翼和是上海市遗传学会理事单位,上海市****,至今已有十六年的历史。安徽目标区段甲基化重测序公司
上海翼和应用生物技术有限公司位于龙腾路1015弄中星创意园2号502。翼和生物致力于为客户提供良好的细胞组织小鼠质控,大健康检测,生物技术服务,一切以用户需求为中心,深受广大客户的欢迎。公司注重以质量为中心,以服务为理念,秉持诚信为本的理念,打造医药健康良好品牌。翼和生物秉承“客户为尊、服务为荣、创意为先、技术为实”的经营理念,全力打造公司的重点竞争力。
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