R&D Systems作为全球免疫学和细胞生物学产品的生产商,1976年创立于美国明尼苏达州,至今已为学术界服务近40年。其母公司Bio-Techne(原Techne公司)于1983年在美国NASDAQ上市。目前,R&D Systems拥有近30,000种产品,95%以上由自己研发生产。其产品包括重组蛋白、细胞因子、ELISA试剂盒、生长因子、趋化因子、抗体、Animal-Free™蛋白、Luminex 液相芯片、多因子检测固相芯片、流式细胞分析与细胞筛选、干细胞及细胞培养等;覆盖发育、糖生物、内分泌、免疫、神经学、蛋白酶、信号传导等学科研究领域;且每年有近2,000种新产品不断问世,以满足不同科研工作者的研究需要。怎么才能让重组蛋白保持良好的稳定性和生物学活性呢?小鼠IL-9重组蛋白
糖基化是指糖基转移酶作用下将糖转移至蛋白质,和蛋白质上的氨基酸残基形成糖苷键。蛋白质经过糖基化作用,形成糖蛋白。糖基化是对蛋白的重要的修饰作用,有调节蛋白质,帮助蛋白质折叠功能作用。在大多数情况下,生长因子或细胞因子的糖基化作用不会直接影响该蛋白与受体之间的结合。所以在体外研究中,重组生长因子或细胞因子的生物活性不会受糖基化作用的过多影响。不过,糖基化蛋白通常对蛋白酶的降解更不敏感具耐受性,所以在体内的半衰期比未经无糖基化的同种蛋白更长。因此在体内研究中,以选择哺乳动物表达系统或昆虫表达系统生产的重组蛋白可能是比大肠杆菌中生产的同种重组蛋白效果更好的一个选择要好。R&DSystemsIGF-II重组蛋白45.苏州近岸蛋白专注生物医药领域中的重组蛋白质。
在细胞培养过程中常用的生长因子,细胞因子和趋化因子,许多科学家倾向使用进口的重组蛋白,如R&D Systems,PeproTech,ProSpec,Gibco等。这就导致可选择范围变得很窄。想要增加重组蛋白可选种类,建议选择国产重组蛋白。如进口品牌赛默飞选择与国产品牌义翘神州(Sino Biologcical)合作来拓展他们的重组蛋白套装范围,为用户提供1500种左右的重组蛋白(Thermo Fisher Scientific与Sino Biological联合品牌)。Sino重组蛋白主要有四大优势:(1)包括粘附蛋白,细胞因子,趋化因子,生长因子,流感蛋白,蛋白酶,磷酸酶,转录因子,通道蛋白和受体在内的多种选择;(2)具有竞争力的价格;(3)为每一种蛋白产品提供更多种的包装尺寸规格(4)大多数由哺乳动物细胞所表达,90%由人体细胞系表达,这样有助于就可确保蛋白产品具拥有正确的哺乳动物翻译后修饰。
如果一个实验周期长于一周,或配制的细胞因子或重组蛋白一次用不完,我们就需对细胞因子或重组蛋白进行长期保存。千万不能将重组蛋白冻干粉用推荐的溶液重悬后直接分装冻存于-20℃至-80℃。塑料管壁对多数蛋白均有很好的吸附作用,也就是说溶液中的蛋白很容易粘附在管壁。直接分装冻存,则溶液中的大部分细胞因子或重组蛋白均会粘附到管壁上,导致溶液中实际溶解的细胞因子或重组蛋白的浓度大为降低,表现为细胞因子或重组蛋白活性的下降。正确的方法是:将已重悬的细胞因子或蛋白用含载体蛋白,如0.1% BSA(牛血清白蛋白),10% FBS(胎牛血清),5% HSA(人血清白蛋白)的溶液将重悬液进一步稀释,然后分装冻存于-20℃至-80℃,即常规冰箱的冷冻室或超低温冰箱中。重组蛋白的活性高低,是实验成功的关键。
购买的重组蛋白单位一般是 μg,重组蛋白检测结果和用量常用单位是 U/mL 或 IU/mL。U是什么?和IU之间有什么差别?它们又是怎么与 μg 进行换算的呢?首先,U 是蛋白活性单位,用于计量蛋白本身的生物学活性。活性单位指在适条件下,单位时间内产生单位生物学效应的蛋白量。以酶为例,1961年,国际生物化学学会酶学委员会提出采用统一的「国际单位」(IU)来表示酶的活力,在合适条件下,每分钟内催化 1 微摩尔(μmol)底物转化为产物或转化底物中 1 微摩尔的有关基团所需的酶量。即 1 IU=1 U=1 μmol/min。IU 与 μg之间的换算,要引入比活性的概念。比活性是指单位质量蛋白的生物学活性单位,通常用 U/μg 或 μmol/min/μg 表示。以酶为例,在合适条件下,如果 1 μg 酶可以在 1 分钟内催化 1μmol 的底物,那么其比活性就是 1U/μg。比活性是重组蛋白的一项重要指标。进行比活性项目的检测,不仅可以反映产品生产工艺的稳定情况,而且可以比较不同表达体系、不同生产厂家生产同一产品的品质情况。比活性高说明产品的生产工艺更先进、纯度更高、质量更优。购买的重组蛋白如何保存?大鼠BMP-1重组蛋白定制
重组蛋白大规模的瞬时表达是研究热点。小鼠IL-9重组蛋白
生产重组蛋白的酵母表达系统兼有原核和高等真核系统的优点,培养条件简单、生长速度快、表达水平高、操作简便、成本低廉,蛋白翻译后能进行正确加工、修饰,合理的空间折叠,使得蛋白的可溶性得到提高,是较优的重组真核生物蛋白生产制备工具。其中毕赤酵母表达系统应用较多,与其他表达系统相比,其较强的AOX1(醇氧化酶)、3-磷酸甘油醛脱氢酶、FLD1(醛脱氢酶)等启动子、蛋白稳定持久表达、表达效率高、可分泌表达蛋白、杂蛋白少、翻译后修饰等优点使其成为酵母表达重组蛋白的优先选择。小鼠IL-9重组蛋白
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