本发明涉及细胞生物学领域，特别涉及一种血小板裂解液的制备方法及其应用，用于替代动物来源的血清，为间充质干细胞扩增和生产提供的营养。该制备方法包括：将血小板在20～24℃振荡保存1～5d,采用反复冻融法和超声法进行处理,离心,收集上清液,去除纤维蛋白,获得血小板裂解液.本发明提供的血小板裂解液的制备方法可明显提高血小板裂解液中细胞因子含量,且可进行细胞因子的定量平衡,有利于减少产品批间的差异,可达到稳定的促进人源性细胞生长的作用。血小板裂解液的正确使用方法。GMP等级血小板裂解液如何制备
在已有的上百篇文献中，报道了Sexton公司的Stemulate和nliven已经被确定为间充质干细胞MSC的良好生长补充剂，并且支持各种组织来源包括脂肪、骨髓、软骨、牙髓和脐带中的MSCs的扩增培养。Sexton公司标准型和PR处理的血小板裂解液始终优于辐照胎牛血清，帮助用户优化MSCs的生产。用户通过使用Sexton公司的血小板裂解液培养基生长剂，降低时间和花费的成本，可带来更快的倍增时间，既可以减少洁净室生产时间，也可以减少试剂的使用量，实现总成本的降低。进口血小板裂解液生产商血小板裂解液的血源从哪里来？
细胞培养基制备1.比较好在4°C下解冻ELAREMPrime血小板裂解液过夜或在37°C水浴中解冻1小时。2.通过将10%ELAREMPrime血小板裂解液添加到基础培养基（即MEMα、GlutaMAX补充剂、无核苷）和1%的青霉素/链霉素作为**终浓度来制备完整的细胞培养基。3.应在完全细胞培养基中加入肝素以抗凝。我们建议添加肝素的**终浓度为2IU/mLPLSUPPLEMENT(货号PL-SUP-500)or0.024mg/mLPLSUPPLEMENT-XF(货号PL-SUP-500-XF).4.完整细胞培养基可在4°C下储存，并稳定约4周储存和稳定性ELAREMPrime在标签上注明的失效日期之前是稳定的。ELAREMPrime在使用前在-20°C（或在-80°C进行长期储存）冷冻储存时稳定。解冻后，建议将未使用的ELAREMPrime样品分装并在-20°C下重新冷冻。应避免ELAREMPrime的重复冻融循环，因为这会导不溶性颗粒形成的增加。使用时，只需预热一份完整的细胞培养基，并将剩余的培养基冷藏在4-8°C。
为了排除肝素对于细胞增长的抑制作用可能与防腐剂（这里采用苄醇作为防腐剂添加到UFH或LMWH中）有关。我们对不添加防腐剂的肝素进行了相同实验，结果对AT-MSC和BM-MSC细胞增殖抑制趋势相同。在随后的传代培养到3代中的累积的群体中，两种肝素UFH和LMWH对MSC增殖的影响也变得明显，血小板裂解液中肝素浓度较低时累积细胞群体倍增指数(cPD)较高，CFU-F的塑料粘附生长性能是MSCs培养的先决条件，在96孔板中通过有限稀释的方法结合泊松统计进行CFU-F试验，显示集落形成率CFU-F在高浓度UFH时中度降低，而在高浓度Enoxaparin（LMWH）时明显降低。这些结果表明高浓度的LMWH减少了CFU-F的形成，这与已报道的其他研究结论一致。血小板裂解液可用于多种细胞培养，如MSC间充质干细胞，角质细胞，成纤维细胞，内皮细胞等。
MSCs是异质性的细胞群，其组成可能受培养条件的影响。血小板裂解液中肝素及其浓度高低对细胞形态和生长模式并未有明显的影响。通过免疫荧光显微镜分析未发现波形蛋白(一种通常在中胚层起源的细胞中表达的中间丝)和α-SMA表达的差异，肝素浓度对于α-SMA(绿色)和波形蛋白(红色)的分布并无影响。脂肪组织源性间充质干细胞（AT-MSC）和骨髓源性间充质干细胞（BM-MSC）本身免疫表型就是相似的，经添加不同浓度肝素的血小板裂解液培养扩增的AT-MSC和BM-MSC的流式细胞分析结果显示出CD29、CD73、CD90和CD105表达，而表面标记CD14、CD31、CD34和CD45的缺失，可见肝素浓度对MSC免疫表型的表达水平几乎是没有影响的。血小板裂解液是由富含血小板的血浆纯化萃取而成,其中包含很多不同的细胞生长因子。血小板裂解液怎样使用
血小板裂解液和胎牛血清相比有什么优势？GMP等级血小板裂解液如何制备
ELAREMPrime血小板裂解液在标签上的有效期内都是稳定的。ELAREMPrime在使用前储存在-20°C或更低温度调节下时稳定性比较好的。解冻后，建议分装并重新冷冻未使用的ELAREMPrime在-20°C下。应避免反复冻融。无菌ELAREMPrime为无菌加工工艺，微生物培养为阴性。质量控制测试由经过认证的第三方测试实验室完成。可追溯性和预防措施ELAREMPrime是从经过EMA授权的**中心的健康捐献者来源的血小板单位生产而来的。献血者均通过欧盟现行的献血者资格准则的资格审核。GMP等级血小板裂解液如何制备
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