共聚焦显微镜常见问题

使用显微镜时，您可能会遇到显微镜的专业术语，这些用语都代表什么意思呢？

综合放大倍率：综合放大倍率=目镜倍率 x 物镜倍率。

视场数（F.N）：视场数指目镜能否在广视野下进行观察的指标。样品表面的观察范围取决于目镜的视场光阑直径，该直径的值（以mm为单位）被称为视场数。F.N=Field Number。

实视场（FOV）：指通过目镜观察时实际观察和观察工件的实际范围。FOV：Field Of View

PC显示倍率（TV综合倍率）：PC显示器倍率（TV综合倍率）是指相机摄像元件对角线长度与PC显示器屏幕对角线长度之比。当显微镜通过CCD 设备连接至电脑上进行成像观察时，就需要评价显示器倍率了。

工作距离（WD）：工作距离是指聚焦时物镜镜头头部顶点到检查物体表面的距离，在该距离下可实现清晰的对焦。工作距离越长,聚焦时操作性越好,不用担心镜头会碰上检查物体。WD：WorkingDistance

齐焦距离（PFD）：齐焦距离是指聚焦时从物镜安装位置到合焦时检查物体表面的距离。PFD：ParFieldDistance

焦点距离（FD）：焦点距离指镜头（主点）到焦点的距离。FD：Focus Distance

焦点深度（DOF）：焦点深度是指聚焦之后,聚焦位置前后移动,也能清晰的观察的前后移动范围。DOF：Depth Of Focus 激光共聚焦显微镜的明显优势。共聚焦显微镜常见问题

显微镜透射照明的方式有两种：（2）柯勒照明柯勒照明光学系统如图2所示。光源经聚光镜前组成像在照明系统的视场光阑上；聚光镜前组经过聚光镜后组成像于标本处，同时也把照明系统视场光阑成像在无限远处，使之与远心物镜的入射光瞳重合。柯勒照明中的前组聚光镜称为柯勒镜，它得到了光源的均匀照明，经过聚光镜后组成像在标本上。故标本上得到均匀的照明，这是柯勒照明的重要特点。聚光镜中的孔径光阑紧贴聚光镜前组，通过聚光镜后组所成的像，即聚光镜的出射光瞳也与显微镜的物平面（标本）贴近，故光阑起到了限制显微镜视场的作用。柯勒照明聚光系统的出射光瞳和像方视场分别与显微镜的物方视场和入射光瞳重合，从而形成“视场对瞳、瞳对视场”的光管。武汉变倍 显微镜探针台用显微镜如何挑选；

扫描探针显微镜的特点：

扫描探针显微镜是除了场离子显微镜和高分辨率透射电子显微镜之后的第三种以原子尺度观察物质结构的显微镜。以扫描隧道显微镜(STM)为例，其横向分辨率为0.1~0.2nm，纵向深度分辨率则为0.01nm，这样的分辨率可以清楚地观测到分布在样品表面的单个原子或分子。同时，扫描探针显微镜还可以在空气，其他气体或液体环境下进行观察研究。扫描探针显微镜拥有原子分辨、原子搬运、纳米微加工等特点，但是由于细部各种扫描显微镜的工作原理不同，它们得到的结果所反映的样品表面信息是很不同的。扫描隧道显微镜测量的是样品表面的电子台分布信息，具有原子级别的分辨率但仍得不到样品的真结构。而原子显微镜探测的是原子之间的相互作用信息，因此可以得到样品表面原子分布的排列信息即样品的真实结构。但另一方面，原子力显微镜测不到可以和理论比较的电子态信息，因此二者各有短长。

共聚焦显微镜扫描时用的是激光光源，激光的穿透力强，可对样本进行一定深度的光学断层，从而获得高标准的连续光学切片，由此做Z轴光学切片后重组出3D效果就能立体地展示样品里荧光的空间分布。配有高精度电动载物台和图像拼接软件，能完美解决放大倍数和整体成像这一问题。可做时间序列拍摄，实时监测荧光变化，可以把荧光变化的过程以动态的形式展示出来。

共聚焦的应用很广，像离体细胞、组织切片、物理材料、模式生物等荧光样本都可以用共聚焦进行拍摄，除了常规的荧光图片拍摄进行定性定位外，还可以进行荧光的半定量分析、共定位分析、荧光漂白恢复（FRAP）、荧光共振能量转换(FRET)等，但也要注意一下，常规405-647nm之间的激发波长都可以支持。 透射电镜主要应用于半导体、材料科学、生命科学等领域。

共聚焦显微镜技术下一步的研究重点应该集中在以下几点：1、更快的扫描速度目前共聚焦扫描速度受限于扫描设备的机械结构，要想获得更快的扫描速度只能牺（xi）牲分辨率。而很多生物过程非常迅速，目前仍然无法检测。2、更wan美的超高分辨率技术目前超高分辨率技术有STORM、PALM、STED和SSIM几种技术，分辨率从20～200nm不等，但是各种技术均有一定缺陷，例如在样品处理、Z轴方向、光毒性等方面还不近wan美，在实际观察中往往很难达到极限分辨率。3、更强的兼容性共聚焦显微镜技术涉及到多种激发方式，例如多光子和光片式观察，相干反斯托克斯拉曼散射在理论上可以公用一套激光系统。超高分辨率显微术可以搭配白激光技术。显微镜的规范操作教程；Optem显微镜

体视显微镜的光路设计；共聚焦显微镜常见问题

显微镜聚光镜

在照明系统中，聚光镜的作用是比较大限度地把光线聚集起来，投射到显微镜的成像系统中。基于聚光镜的功能，对聚光镜像质的要求为球差和色差，以和显微镜物镜的像差相适应。

显微镜色差

一般在设计时，只在可能条件下取得最小值即可，故聚光镜的选料很重要。聚光镜的材料宜选用低色散的光学玻璃（如K9玻璃)。由于位置色差在视场中叠加的结果是在其边缘出现彩色现象，只要使照明的区域大于标本的尺寸就能避免色差的影响。但是，对柯勒照明来说，要求聚光镜把它的光阑成像在物面上，避免色差影响以消色差聚光镜的方案替代了。消色差聚光镜的结构类似于高倍显微镜物镜，只是焦距比较长，以使光束能够通过较厚的载物玻璃（约2mm)照亮标本。

球差存在将影响聚光镜对光线的聚集能力，降低照明的效果。

共聚焦显微镜常见问题

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