研究显示NL189BLA神经元通过投射到CEA来控制探索行为中动物的运动速度和瞬时停滞。随着进一步的探索,该神经元群体的活性以经验依赖性的方式增加,而NL189BLA神经元的暂时性功能丧失会导致瞬间停滞的yi zhi,而且这些行为停滞与焦虑和恐惧无关。动物在这些停滞点开始和终止探索性旅程并在停滞后会改变头部朝向和运动轨迹方向,因此在熟悉的位置进行短暂停滞可能是替代性尝试错误行为的决策。这些结果揭示杏仁核作为新颖性/熟悉性检测器以及行为效应器环路的共同作用,其具有基于探索行为期间的空间经验来驱动或yi zhi自发运动的能力,这对于动物在自然界中安全有效的探索未知环境是十分必要的。钙成像技术利用钙离子流的优势在活神经细胞上直接可视化钙信号。宁波超微显微钙成像
大家都知道,只有游离钙才具有生物学活性,而细胞质内钙离子浓度由钙离子的内外流平衡所决定,同时也受钙结合蛋白的影响。细胞外钙离子内流的方式有很多种,其中包括电压门控钙离子通道、离子型谷氨酰胺受体、烟碱型胆碱能受体(nAChR)和瞬时受体电位C型通道(TRPC)等。神经元钙成像的原理就是利用特殊的荧光染料或钙离子指示剂将神经元中钙离子浓度的变化通过荧光强度表现出来,以反映神经元活性。该方法可以同时观察多个功能或位置相关的脑细胞。南京钙成像参考价细胞对钙离子有一套完备的监控系统以维持钙的内稳态平衡。
Anderson研究团队发现实验室雄性小鼠对雌性和雄性的攀爬行为可以通过是否存在超声发声(USV)来区分。这些和更多的行为数据表明,大多数雄性主导的攀爬是攻击性的,尽管在极少数情况下可能是性行为。研究人员调查了USV+和USV-攀爬是否使用相同或不同的下丘脑神经基质。通过使用Inscopix自由行为显微钙成像方法观察内侧视前区(MPOA)或腹内侧下丘脑腹侧细分(VMHvl)中雌jisu受体1(ESR1)阳性神经元,发现在小鼠活动中可以解码出在USV+和USV-攀爬过程中神经元活动的独特模式。交叉光遗传刺激表达ESR1和囊状GABA转运蛋白(VGAT)的MPOA神经元,可促进USV+攀爬,并将雄性的定向攻击转换为USV攀爬。
转基因Ca2+指示剂:转基因技术和光遗传技术的飞速发展,催生了基因编码的Ca2+指示剂(GECIs)。它们不依赖于荧光染料,可以靶向特定的组织,如神经细胞、心肌细胞、T细胞等,并且可以避免荧光指示剂带来的的许多问题,是监测转基因动物体内钙离子的一个极好的工具。个基因编码的钙离子指示剂Cameleon早在1997年就发表了。它是利用与钙离子结合后发生结构变化,作为供体的CFP和作为受体的YFP之间产生FRET的原理。2000年,GCaMP诞生了。它是增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和钙调蛋白(结合钙离子)、钙调蛋白结合肽M13组成的,结合钙离子后,钙调素-M13相互作用引起GFP空间结构变化,发出绿色荧光(图5)。GCaMP的问世有着**性的意义,它改变了我们观察神经元群体活动的方式,让科学家们可以在成千上万的细胞中,看到哪些神经元在放电,它们放电的模式和规律是怎样的,从而进一步探索各种内在的神经机制。细胞内钙成像技术是通过向细胞内载入钙指示剂。
钙离子在很多生理性的活动中都发挥着重要作用,除了在肌肉细胞收缩中扮演着重要角色,钙离子也是神经元活动的重要“风向标”之一:当神经元膜电位发生去极化,产生的动作电位传导到神经元轴突末梢时,细胞膜上的电压门控钙离子通道打开,大量钙离子内流,包含神经递质的囊泡由突触前膜释放至后膜,下游神经元就得以接受到上游的信号。因此,钙离子成像可以追踪神经元动作电位,从而帮助我们了解神经元集群的活动,可以用于感知觉,学习记忆,社会性行为等各种各样的研究中。双光子荧光显微镜能够在进行活动动物成像的时候实现高分辨率和高信噪比。宁波超微显微钙成像
钙成像相关仪器设备设计团队一直在研究并提高系统成像帧速、系统信号水平。宁波超微显微钙成像
解决钙成像装置对核磁成像的干扰:考虑到金属对核磁成像的影响,研究人员在核磁共振成像的模块上装上了钙成像模块,该成像模块所有的金属元件全部被更换为非导电塑料。考虑到磁场对光纤记录系统的干扰,减少钙信号的噪音,将相干光纤激光器与核磁共振放置相邻不同的房间。解决钙成像和核磁成像区域的一致性:在成像过程中,以皮层区域的血管分布为参照物,以保证钙成像和核磁成像的区域基本保持一致。但在实际成像中,钙离子变化和血氧水平依赖性信号所响应的区域并不是完全重合。因此研究人员将响应区域内的信号变化幅度进行均一化,尽量避免因统计阈值引起差异。宁波超微显微钙成像