上海哺乳动物纺锤体兼容大部分显微镜

纺锤体观测仪在补救ICSI中的应用

我们知道，成熟的卵母细胞排出***极体。IVF加入精子后，精子会穿透层层障碍**终进入卵子，随着时间的推移，卵子的纺锤体会将染色单体拉向两极，进而排出第二极体，再往后大约加精后9-16小时，雌雄原核会出现，而原核的出现才是受精的标志。但是对于那些没有受精的卵子，到了原核出现的时间窗，发现没有受精时再去补救ICSI，往往错过了卵子的比较好受精时间，因为没有受精的卵子会在体外老化，即使受精，胚胎的发育潜能也很低。所以，我们在加精后的4-6小时，通过观察第二极体的排出来初步判断是否受精，**的增加了那些受精障碍患者的受精率，也避免了卵子的老化。

当然，偶尔也会出现错误补救。文献报道对IVF受精后的未排出第二极体的卵母细胞进行ICSI补救，实验组用纺锤体观测仪观察并统计纺锤体的数目，82.7%含有一个纺锤体，17.3%含有两个纺锤体，并对含有一个纺锤体的卵母细胞进行补救ICSI；而对照组并未用纺锤体观测仪观察纺锤体，只对未排出第二极体的卵母细胞进行补救ICSI。结果发现，使用纺锤体观测仪观察纺锤体的数目能显著提高正常受精率，降低多原核受精比率。 纺锤体的一端连接着染色体，另一端则锚定在细胞两极。上海哺乳动物纺锤体兼容大部分显微镜

纺锤体

      特殊细胞器

      纺锤体(Spindle Apparatus)，形似纺锤，是产生于细胞分裂前初期(Pre-Prophase)到末期(Telophase)的一种特殊细胞器。其主要元件包括微管(Microtubules)，附着微管的动力分子分子马达(Molecular motors),以及一系列复杂的超分子结构。一般来讲，在动物细胞中，中心体是纺锤体的一部分。高等植物细胞的纺锤体不含中心体。而***细胞的纺锤体含纺锤极体(Spindle Pole Body)，一般被视为中心体的同源细胞器。

       纺锤体是由大量微管纵向排列组成的中部宽阔、两级缩小的如纺锤状的结构。在细胞分裂中，纺锤体对卵母细胞染 色体的运动、平衡、分配以及极体排出都非常重要。卵母细胞纺锤体的异常会导致减数分裂异常，产生非整倍体的卵母细胞或者成熟阻滞的卵母细胞。 昆明Hamilton Thorne纺锤体玻璃底培养皿纺锤体在细胞分裂过程中经历明显的形态和结构变化。

纺锤体生成

      在含中心体的细胞中，纺锤体的生成开始于细胞分裂前初期 - 即在细胞核膜分解(Nuclear Envelope Breakdown, NEB)之前。初期的结构为两个**的以中心体为核的星状体(asters)。当细胞核膜分解后，染色体和星状体发生一系列复杂的互动反应。**终结果为所有的染色体在纺锤体的**(赤道板,)排列整齐，每两条染色体有一个着丝点，每一个着丝点被一束极性相同的微管（通常称为纺锤丝）附着。此时细胞处于分裂中期，纺锤体生成完毕。实验证明，中心体在这个过程中的作用不是必需的。动物细胞在中心体被激光捣毁后仍旧能够筑构纺锤体，但其位置通常不在细胞的大致几何中心，其后的胞质分裂也会受严重影响。纺锤体 [1]

       在不含中心体的细胞中，纺锤体的生成是由染色体本身主导的。此过程由一小分子量的GTP连接蛋白（Ran GTPase）控制。细胞核分解后，纺锤丝由染色体周围生成。其后这些纺锤丝会在动力分子与为微管动力的合作影响下自动排列为极性相反大致数目相同的两组。每组的极性相对于一组着丝点。同时在微管远端的动力蛋白 dynein 会将这些微管束集中到一点，形成纺锤极区(Spindle Polar Zone)。与此同时，染色体会自动在赤道板排列整齐。纺锤体生成完毕。

秋水仙素为什么会使有丝分裂的细胞停滞于中期

如果用秋水仙素处理有丝分裂的细胞，纺锤体会迅速消失，细胞停滞在有丝分裂中期，染色体无法分离成两组。用秋水仙碱进行诱导，从而将细胞阻断在细胞分裂中期，也是诱导细胞周期同步化的重要方法之一。真核细胞周期可分为4个时期，分别是G1期、S期、G2期和M期。在细胞周期调控中主要有3个控制点，***个控制点在G1期，决定细胞能否进入S期；第二个控制点在G2期，决定细胞能否进入有丝分裂期；第三个控制点在M期，决定细胞是否已经准备好将复制好的染色体拉向两极。CDK（周期蛋白依赖性蛋白激酶）对细胞周期运行起着**性调控作用，CDK与不同时期的周期蛋白结合会在特定周期起调节作用。cyclinA、cyclinB是在M期起调节功能的两种主要周期蛋白。细胞周期运转到分裂中期后，在后期促进复合物(APC)的作用下，M期cyclinA和cyclinB通过泛素化途径迅速降解，Cdkl活性丧失，细胞周期便从M期中期向后期转化。APC活性变化是细胞周期由分裂中期向后期转换的关键因素，其活性受到多种因素的综合调节，纺锤体组装检查点是其重要的调控因素。纺锤体组装不完全，或所有动粒不能被动粒微管全部捕捉，则APC不能被***。 纺锤体在细胞分裂完成后迅速解体，为细胞进入下一个周期做准备。

光学相干断层成像是一种基于低相干光干涉原理的成像技术，具有高分辨率、非侵入性和实时成像等特点。在纺锤体卵冷冻研究中，OCT技术可用于观察卵母细胞内部结构的细微变化，包括纺锤体的形态和位置。虽然目前OCT技术在纺锤体成像方面的应用还较为有限，但随着技术的不断发展和完善，相信未来OCT将在纺锤体卵冷冻研究中发挥更加重要的作用。虽然MRI和超声波成像在生殖医学中主要用于软组织的成像，如子宫、卵巢等病变检测，但它们在纺锤体卵冷冻研究中的应用也值得探讨。随着技术的不断进步，高分辨率MRI和超声波成像技术可能会实现对卵母细胞内部结构的更精细观察。纺锤体形成的精确性对于维持生物体遗传稳定性至关重要。香港成熟卵母细胞纺锤体Hoechst染料

纺锤体在细胞分裂后期推动染色体向细胞两极移动。上海哺乳动物纺锤体兼容大部分显微镜

胞质膜

      在动物细胞的细胞分裂结束时，母细胞在一个被称为“胞质分裂”的过程中分裂成两个子细胞和分区隔离的染色体。有丝分裂纺锤体控制胞质膜上的“胞质分裂”事件，但连接这两个宏观结构的机制一直不清楚。Mark Petronczki及其同事提供了一个结构和功能分析结果，他们发现**纺锤体蛋白（纺锤体中间区域和中间体中的一个蛋白复合物）是有丝分裂纺锤体与胞质膜间所缺失的联系环节，这个联系环节确保“胞质分裂”过程的***结果。本文作者还发现，**纺锤体蛋白的MgcRac***亚单元中的一个区域为一个“系绳”，它连接到胞质膜中的磷酸肌醇脂质上。 [4] 上海哺乳动物纺锤体兼容大部分显微镜

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