方法:使用两种已知浓度的质控乳胶珠溶液,1份浓度为(35±5)×106/ml,另1份浓度为(18.0±2.5)×106/ml,评价4种计数方法的准确性和精确性,并比较4种方法计数精液的结果。结果:计数乳胶珠时,CellVU计数池的结果**接近已知浓度,分别为(39.70±4.76)、(19.09±2.02)×106/ml,变异系数(CV)值分别为12.80%和10.58%;血细胞计数池和Makler计数池结果均高于已知浓度,前者为(44.84±4.86)×106/ml、(21.04±1.87)×106/ml,CV值分别为10.81%和8.89%,后者为(52.36±7.78)×106/ml、(24.54±3.67)×106/ml,CV值分别为14.86%和14.96%;CASA系统结果低于已知浓度,为(28.53±2.06)、(14.62±0.95)×106/ml,但CV值比较低,分别为7.22%和6.50%。计数精液时,CellVU计数池与CASA系统结果差异无***性(P=0.71),分别为(45.28±34.52)、(41.96±31.93)×106/ml,血细胞计数池和Makler计数池结果差异无***性(P=0.14),分别为(76.98±59.90)、(63.89±53.84)×106/ml,CellVU计数池、CASA系统与血细胞计数池、Makler计数池结果间差异***(P<0.05或P<0.01)。结论:计数精液时,CASA系统与CellVU计数结果差异无***性。各实验室可选择合适的手工或CASA计数方法。计算机辅助精子分析根据初估的精子浓度选择合适的检测方法,确保检测过程的准确性和可靠性。北京计算机辅助精子分析精确温度控制
CASA精子运动速度和运动轨迹特征主要参数有:①轨迹速度(VCL):也称曲线速度,即精子头部沿其实际行走曲线的运动速度。②平均路径速度(VAP):精子头沿其空间平均轨迹的运动速度,这种平均轨迹是计算机将精子运动的实际轨迹平均后计算出来的,可因不同型号的仪器而有所改变。③直线运动速度(VSL):也称前向运动速度,即精子头部直线移动距离的速度。④直线性(LIN):也称线性度,为精子运动曲线的直线分离度,即VSL/VCL。⑤精子侧摆幅度(ALH):精子头实际运动轨迹对平均路径的侧摆幅度,可以是平均值,也可以是最大值。不同型号的CASA系统由于计算方法不一致,因此相互之间不可直接比较。⑥前向性(STR):也称直线性,计算公式为VSL/VAP,亦即精子运动平均路径的直线分离度。⑦摆动性(WOB):精子头沿其实际运动轨迹的空间平均路径摆动的尺度,计算公式为VAP/VCL。⑧鞭打频率(BCF):也称摆动频率,即精子头部跨越其平均路径的频率。⑨平均移动角度(MAD):精子头部沿其运动轨迹瞬间转折角度的时间平均值。⑩运动精子密度:每毫升精液中VAP>0μm/s的精子数。北京水生动物精子分析BCF全自动精子分析仪极大提高临床检验水平,广泛应用于泌尿科,男性科以及计划生育、优生优育研究等。
CASA系统也可用于精子形态学评估。CASA系统可用来定量分析精子头部形态学、中段甚至主段的形态,可以把精子头部和中段分类为正常或者不正常,还可以给出头部和中段尺度、头部椭圆率和匀称性的均数、标准差和中位数,以及对染色的精子顶体区进行测量[3]。
与人工操作相比,自动化系统更具客观性,精确度和重复性的潜力[4]。精确度和重复性不低于7%[5],这优于有经验的技术人员的手工评估。两个研究已经提示在CASA结果与生育力之间存在***联系。Coetzee等发现自动分析的正常精子形态的结果是预示体外受精率和妊娠率的有意义指标[6]。Garrett等发现**中能与透明带结合的、具有某些头部形态特征的精子所占的百分比(Z%),和直线速度(VSL)的精子的百分比,与大样本的低生育力夫妇的自然妊娠率是有***且**的关系。Z%和VSL与生育力间的关系显示是连续的,而且没有显示临界值;高于临界值,妊娠率也不会进一步增加[7]。
Hamilton Thorne精子分析仪IVOS Ⅰ与IVOS Ⅱ一致性比对分析
根据质量控制的要求,对新精子分析系统进行性能验证后,应与旧系统进行一致性评价,从而保证检测结果的准确性。方法:选用原有Hamilton Thorne精子分析仪IVOSⅠ为参比仪器,新购仪器IVOSⅡ为实验仪器,对精子分析系统的主要参数(精子浓度、前向运动精子百分率、总活力)进行分析比对。结果:两台仪器的方法内和方法间离群值检验、偏倚图和散点图的线性关系和离群值检测所有参数均能符合比对要求,检测结果具有相关性;对实验仪器的检测结果适合范围的检验,当其精子浓度r=0.988,前向运动精子百分率r=0.975,总活力r=0.981,r均≥0.975,表明取值范围合适;对预期偏倚(Bc)的接受性评价表明当精子浓度在12×10~6/ml,允许总误差(TEa)为6.67%;当前向运动精子百分率<31%,TEa为2.34%,两项检测的Bc上限<1/2允许误差(Ea),实验仪器经比对分析显示符合质控要求。结论:通过比对分析,得出两台精子分析系统的主要参数(精子浓度、前向运动精子百分率、总活力)结果具有可比性,检测结果一致,可同时用于临床标本的检测。 HAMILTON THORNE精子分析仪可分析参数,鞭打频率(BCF):精子曲线路径跨越其平均路径的平均频率。
扩展性检查:可以在某些情况下由实验室选择或根据临床医生的特殊要求而使用的项目。手册增加了精子DNA损伤、遗传学和炎症细胞等相关检查项目。提出了基因突变是导致不育和精液常规检查异常的原因。新增了精液相关细胞因子、趋化因子等检测的方法、试剂、检测步骤等内容。在精液参数异常的男性中普遍存在精子DNA损伤,并且已有报道指出其与精液参数正常男性的不育有关。由于与精液质量相关,精子DNA损伤检测是男性不育检查中的重要补充内容,已成为男科学基础和临床中论述**多、**有前景的精子损伤分子标志物之一。本版手册增加了大量篇幅对其原理和检测方法进行了描述。新增了基因和基因组测序内容。临床上,越来越多的人意识到染色体异常[数量异常、结构异常(包括微缺失和微重复)]和基因突变是导致各种男性不育症的基础病因,而这正是在精液分析中观察到的许多异常的原因。尽管基因和基因组测序常规在医学遗传学实验室进行,但一些男科实验室也在做同样的检测。为明确生殖道炎症对于男性不育的影响,泌尿男科医生可能提出对精液中的趋化因子和细胞因子进行评估。本手册纳入了精液中白细胞介素检测方法。精子分析系统较传统的分析法比较,具有速度快、量比性好、准确性高、为临床和科研提供客观的检测依据。慢速运动精子分析LIN
不同品牌CASA分析的结果差异较大,因此,更高效精确的精液质量检测系统对促进男科学发展具有重要的意义。北京计算机辅助精子分析精确温度控制
CASA可将每个精子的活力按以下分级:(1)前向运动型(PR):精子运动活跃、线性运动或者在较大的范围内运动。(2)非前向运动型(NP):所有其他非前向运动的形式,如精子在较小的范围内运动,精子头部轻微移位或只观察到尾部摆动。(3)完全不动型(IM):精子完全不动。CASA系统检测的这些参数有一套标准的术语。(1)VCL=曲线速度(mm/s)。精子头沿其实际的曲线,即在显微镜下见到的二维方式运动轨迹的平均速度。检测细胞活力。(2)VSL=直线速度(mm/s)。根据精子头在开始检测时的位置与***所处位置之间的直线运动的时间平均速度。(3)VAP=平均路径速度(mm/s)。精子头沿其空间平均轨迹移动的时间平均速度。(4)ALH=精子头侧摆幅度(mm)。精子头沿其空间平均轨迹侧摆的幅度。以侧摆的最大值或平均数值表示。(5)LIN=直线性。曲线轨迹的直线性。即VSL/VCL。(6)WOB=摆动性。精子头沿其实际轨迹的空间平均路径摆动的尺度。即VAP/VCL。(7)STR=前向性。空间平均路径的直线性。即VSL/VAP。(8)BCF=鞭打频率(Hz)。精子曲线轨迹越过其平均路径轨迹的时间平均速率。(9)MAD=平均移动角度(度)。精子头沿其曲线轨迹瞬间转折角度的时间平均***值。北京计算机辅助精子分析精确温度控制
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