精子手工计数原理及操作方法
1.原理：将精液用适当的稀释液作一定量稀释后，混匀注入计数池内计数，再算出每毫升精液中精子数。2.方法（按照***版第四版《全国临床检验操作规程》）1).于小试管内加精子稀释液0.38ml,取液化精液20μl,加入稀释液内混匀。2).充分摇匀后,滴入改良Neubauer计数板的计数池内,静置1~2分钟,待精子下沉后,以精子头部作为基准进行计数。
3.计算1).如每个**中方格内精子少于10个,应计数所有25个中方格内的精子数。2).如每个**中方格内精子在10~40个,应计10个中方格内的精子数。3).如每个**中方格内精子多于40个,应计数5个中方格内的精子数。公式：精子数=计数结果/计数中方格×25×1/计数池高度×20×103/ml=计数结果/计数中方格×1/计数池高度×5×103/ml CASA系统减少了人为因素对检测结果的影响，提高了检测的客观性和可重复性。香港前向运动精子分析VAP
**分析是判断男性生育能力的**基本和**重要的常规检测方法。目前我国医学实验室普遍使用人工方法进行分析，结果缺少准确性、客观性和可比性。虽然WHO于近几年多次修改并推荐**常规分析的标准方法，但仍不能充分克服人为主观因素的影响。特别是对精子的活率和活力的分级主要依赖检验者的经验和主观判断，不同的技术人员分析的结果有时相差甚远，对精子运动能力的判断缺少严格的量化指标。因此应用一种统一、标准和快速的检测方法替代人工方法十分必要。计算机计算机辅助**分析系统在**质量检测中的应用49中国卫生信息管理杂志第8卷第6期辅助精子分析（Computer-aidedSpermAnalysis,CASA）系统逐步取代了人工操作，在男性不育症临床诊治及科研中CASA技术弥补了人工方法进行**分析的不足。香港计算机辅助精子分析VAP精子分析仪因其高效、J准的特点，已经在众多医疗机构中广泛应用，深受患者信赖。
在精子形态学检查中，通过CASA系统对精子形态学特征进行分析，有些特征（细胞大小、形状、光学密度、尾的存在以及其它）可由操作者选择，这样就会引起同一标本在不同实验室或不同分析者测得的结果一致性较差[10]。4结论和展望计算机辅助**分析具有较好的可靠性、重复性和稳定性，与传统的光学显微镜目测估计相比，更具有快速方便、对比性强、便于交流等明显优点[11]，常规**检查无法测定精子微细运动特点，显示CASA在男性不育症诊断筛选中的优越性。王益鑫亦发现，部分手工**检查正常的不育患者，进行**全自动分析及生化检测，均发现明显异常[12]。因此，CASA系统在男性生殖能力检验方面具有重要的实际应用意义。
CASA可将每个精子的活力按以下分级：（1）前向运动型（PR）：精子运动活跃、线性运动或者在较大的范围内运动。（2）非前向运动型（NP）：所有其他非前向运动的形式，如精子在较小的范围内运动，精子头部轻微移位或只观察到尾部摆动。（3）完全不动型（IM）：精子完全不动。CASA系统检测的这些参数有一套标准的术语。（1）VCL=曲线速度（mm/s）。精子头沿其实际的曲线，即在显微镜下见到的二维方式运动轨迹的平均速度。检测细胞活力。（2）VSL=直线速度（mm/s）。根据精子头在开始检测时的位置与***所处位置之间的直线运动的时间平均速度。（3）VAP=平均路径速度（mm/s）。精子头沿其空间平均轨迹移动的时间平均速度。（4）ALH=精子头侧摆幅度（mm）。精子头沿其空间平均轨迹侧摆的幅度。以侧摆的最大值或平均数值表示。（5）LIN=直线性。曲线轨迹的直线性。即VSL/VCL。（6）WOB=摆动性。精子头沿其实际轨迹的空间平均路径摆动的尺度。即VAP/VCL。（7）STR=前向性。空间平均路径的直线性。即VSL/VAP。（8）BCF=鞭打频率（Hz）。精子曲线轨迹越过其平均路径轨迹的时间平均速率。（9）MAD=平均移动角度（度）。精子头沿其曲线轨迹瞬间转折角度的时间平均***值。Hamilton Thorne精子分析仪是一款功能强大、准确可靠的精子质量评估设备。
二、生化及免疫学检验：1、精浆果糖测定【正常参考值】9.11-17.67mmol/L。【临床意义】（1）精液果糖为0，可见于先天性两侧输精管及精囊腺缺如、两侧输精管完全阻塞或逆行**。（2）精液果糖降低，常见于精囊炎和雄***分泌不足，果糖不足可导致精子运动能量缺乏，甚至不易受孕。2、精浆酸性磷酸酶测定【正常参考值】金氏法：＞255nmol·s-1/L【临床意义】（1）精浆酸性磷酸酶含量增高，常见于前列腺肥大或早期前列腺恶性**患者。（2）精浆酸性磷酸酶含量降低，常见于前列腺炎患者。（3）精浆酸性磷酸酶检测是法医鉴定有无精液**敏感的方法。3、精浆顶体酶活性测定【正常参考值】36.72±21.43U/L。【临床意义】精子顶体酶活力与精子密度及精子顶体完整率呈正相关，其活力不足，可导致男性不育。4、精浆乳酸脱氢酶-X同功酶(LDH-X)测定【正常参考值】LDH-X***活性：2620±1340U/L；LDH-X相对活性：≥0.426。【临床意义】LDH-X具有睾丸及精子的组织特异性，是精于运动获能的关键酶，该酶检测可作为诊断男性不育有价值的指标。睾丸萎缩患者LDH-X降低或消失，精子发生缺陷时无LDH-X形成，少精或无精者可致LDH-X活性降低。服用棉酚也可抑制此酶活性。IVOS和CEROS集成了智能化的分析软件，能够自动识别和计算精子的各项参数，减少了人工操作的误差。北京CASA精子分析ALH
HAMILTON THORNE精子分析仪可分析参数，鞭打频率（BCF）：精子曲线路径跨越其平均路径的平均频率。香港前向运动精子分析VAP
采集精液前5～7天内必须停止性生活，并且不得有**、梦遗等情况，还应禁烟戒酒，忌服对生精功能有影响的药物等。采取精液时间以晨起为佳，采精前用温水将双手、**，尤其是**洗净。可采用**法或电动按摩**法引起排精。精液的排出具有一定顺序，开头部分来自前列腺、附睾及壶腹，伴有大量精子，***部分来自精囊，故应收集整份精液，不要遗漏任何部分，尤其是开头部分。正因为易丢失精液的***部分,故不能用体外**法收集精液。盛精液的容器应干净、无菌、干燥，采精前容器的温度应与室温相同；瓶子不应过大，但瓶口不应过小，以免将精液射出瓶外；还应贴上标签，记录姓名及取精时间。在冷天应将精液标本保温，放置在贴身内衣袋中，不可倾斜或倒置，尽可能在1小时内送到实验室。香港前向运动精子分析VAP
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