ROX通常并不指代一种特定的荧光定量PCR仪,而是一种荧光染料,在荧光定量PCR中常被用作被动参考染料。其作用是用于校正荧光信号,减少孔与孔之间由于加样误差、反应体积差异、光学系统的微小变化以及蒸发等因素导致的荧光信号波动,提高实验的准确性和重复性。在实时荧光定量PCR仪的使用中,很多仪器都可以兼容ROX染料进行信号校正。例如,赛默飞世尔的QuantStudio系列、ABI的7500、7900等型号的荧光定量PCR仪都支持ROX染料。不同的荧光定量PCR仪在检测通道、光学系统、热循环性能等方面存在差异,但只要其具备相应的荧光检测通道,能够检测ROX染料的荧光信号,并在软件中支持以ROX信号作为参考进行数据校正,就可以在实验中使用ROX染料来辅助提高定量分析的准确性。例如,QuantStudio1实时荧光定量PCR仪采用新型Optiflex光学检测架构,提供FAM、VIC和ROX三种常用激发和发射滤光片,实现3重实时定量分析。强度高且稳定的光源能保证 TET 染料被充分激发,而高灵敏度、低噪声的探测器可准确捕捉微弱荧光信号。无锡荧光定量PCR仪哪个好

选择适合自己的荧光定量 PCR 仪,需要综合考虑多个因素,实验类型:如果是进行常规的基因表达分析、病原体定量检测,普通的单通道或多通道荧光定量 PCR 仪即可满足需求。例如,赛默飞世尔的 QuantStudio 3,适用于基础的基因表达和病原体检测实验。若是涉及到复杂的多重 PCR 实验、SNP 基因分型,则需要选择具有更多荧光通道、更高分辨率的仪器,如罗氏的 LightCycler 480,可同时检测多个荧光信号,适用于多重分析。通量要求:根据实验样本数量来选择。对于样本量较少的实验,如小型实验室的科研项目或临床诊断的少量样本检测,96 孔板的荧光定量 PCR 仪就足够,如伯乐的 CFX96。而对于高通量的检测需求,如大规模的基因筛查、药物研发中的大量样本筛选,可能需要选择 384 孔板的仪器,如 ABI 7900HT,能提高实验效率,减少实验成本。泰州YELLOW荧光定量PCR仪经销商反应体系配置:配置反应体系时,需确保各试剂充分混合均匀,避免局部浓度不均影响反应进行。

VIC与 FAM 类似,是一种荧光报告基团,可标记在引物或探针上用于荧光定量 PCR。它在 PCR 过程中,随着引物或探针与目标 DNA 的结合以及 PCR 产物的扩增,会发出特定波长的荧光,其荧光信号强度与 PCR 产物的量成正比,通过检测荧光信号的变化来实现对目标 DNA 的定量分析。特点:激发波长和发射波长与 FAM 有所不同,激发波长约为 538nm,发射波长约为 554nm,荧光颜色为黄绿色。VIC 常用于多重荧光定量 PCR 中,可与 FAM 等其他荧光染料同时使用,实现对多个不同目标基因的同时检测,因为其光谱特性与其他染料有较好的区分度,能避免荧光信号之间的相互干扰。
试剂兼容性:选择与常用试剂品牌兼容性好的仪器,避免因试剂与仪器不匹配而导致实验结果不稳定或无法进行。一些仪器厂家会提供配套的试剂,以保证实验的比较好效果,如罗氏的荧光定量 PCR 仪与罗氏的 TaqMan 试剂配合使用,能发挥良好的性能。软件功能:功能强大的软件应具备实时监测、数据分析、结果可视化等功能,并且操作界面友好,易于上手。例如,仪器软件能够自动进行基线校正、阈值设定,还能进行基因表达差异分析、SNP 分型结果分析等。售后服务:考虑仪器制造商的售后服务质量,包括技术支持、维修保养、培训服务等。良好的售后服务可以帮助用户解决在使用过程中遇到的问题,确保仪器的正常运行。拥有高灵敏度的光学检测系统,能够精确检测 TET 等荧光染料发出的微弱荧光信号,保证检测结果的准确性。

荧光定量 PCR 仪是一种精密的仪器,正确的维护和保养可以延长其使用寿命,保证仪器的性能和检测结果的准确性。定期维护:光路系统校准:根据仪器的使用频率和厂家建议,定期对光路系统进行校准,以确保荧光信号检测的准确性。校准过程通常需要使用标准荧光样品和专业的校准工具,由专业技术人员进行操作。温度校准:荧光定量 PCR 仪的温度准确性对实验结果至关重要。定期使用标准温度计或温度校准设备对反应模块的温度进行校准,确保各个孔位的温度均匀性和准确性符合要求。一般建议每 3 - 6 个月进行一次温度校准。更换耗材和部件:根据仪器的使用情况,定期更换易损耗材,如反应板、密封垫、移液器吸头等。对于一些关键部件,如荧光检测模块的灯泡、滤光片等,按照厂家规定的使用寿命进行更换,以保证仪器的性能稳定。软件更新:及时更新仪器的控制软件和数据分析软件,以获得更好的性能和功能,同时修复可能存在的软件漏洞。在更新软件前,要备份好重要的实验数据,防止数据丢失。具有准确的温度控制系统,确保 PCR 反应在不同的温度阶段精确进行,以保证 TET 染料在合适的条件下发挥作用。泰州YELLOW荧光定量PCR仪经销商
激发光源能够稳定且有效地激发 TET 荧光染料,使其发出足够强的荧光信号。无锡荧光定量PCR仪哪个好
荧光染料法原理:一些荧光染料(如 SYBR Green I)能特异性地结合到双链 DNA 上。在 PCR 反应体系中,随着 DNA 扩增产物的不断增加,与双链 DNA 结合的荧光染料也越来越多,荧光信号强度与 PCR 产物的数量呈正相关。通过检测荧光信号的强度变化,就可以实时监测 PCR 反应的进程。过程:在 PCR 反应的每一个循环中,当温度降低到退火温度时,引物与模板结合,DNA 聚合酶开始延伸引物,合成新的 DNA 链。此时,荧光染料会结合到新合成的双链 DNA 上,仪器会在特定的时间点检测荧光信号的强度。随着循环次数的增加,荧光信号逐渐增强,当信号强度达到设定的阈值时,对应的循环数被称为阈值循环数(Ct 值)。定量依据:在一定的范围内,起始模板量与 Ct 值呈对数关系。即起始模板量越多,达到阈值所需的循环数越少,Ct 值越小;反之,起始模板量越少,Ct 值越大。通过已知浓度的标准品建立标准曲线,再根据待测样本的 Ct 值,就可以在标准曲线上计算出其对应的起始模板量。无锡荧光定量PCR仪哪个好