荧光标记探针法原理：使用一种特异性的荧光标记探针，它能与目标 DNA 序列杂交。探针的 5' 端标记有荧光报告基团，3' 端标记有荧光淬灭基团。在游离状态下，报告基团发出的荧光会被淬灭基团吸收，无法检测到荧光信号。当 PCR 反应进行时，DNA 聚合酶在延伸引物的过程中，会将探针水解，使报告基团与淬灭基团分离，报告基团发出的荧光信号就可以被仪器检测到。每扩增一条 DNA 链，就会有一个探针被水解，释放出一个荧光信号，荧光信号的强度与 PCR 产物的数量成正比。过程：在 PCR 反应的退火阶段，荧光标记探针会与目标 DNA 序列特异性结合。在延伸阶段，DNA 聚合酶的 5' - 3' 外切酶活性会将探针从 5' 端开始逐个水解，使报告基团游离出来，产生荧光信号。仪器会在每个循环的延伸阶段检测荧光信号的强度，随着 PCR 反应的进行，荧光信号逐渐增强，同样可以得到 Ct 值。定量依据：与荧光染料法类似，通过标准品建立标准曲线，根据待测样本的 Ct 值在标准曲线上计算出起始模板量。由于荧光标记探针具有特异性，能与特定的目标序列杂交，因此可以更准确地对目标基因进行定量分析，减少非特异性扩增的干扰。TET 的激发波长和发射波长使其能够在特定的荧光通道中被准确检测到，通常其激发波长在 520 - 550nm 左右；常州VIC荧光定量PCR仪
荧光染料法原理：一些荧光染料（如 SYBR Green I）能特异性地结合到双链 DNA 上。在 PCR 反应体系中，随着 DNA 扩增产物的不断增加，与双链 DNA 结合的荧光染料也越来越多，荧光信号强度与 PCR 产物的数量呈正相关。通过检测荧光信号的强度变化，就可以实时监测 PCR 反应的进程。过程：在 PCR 反应的每一个循环中，当温度降低到退火温度时，引物与模板结合，DNA 聚合酶开始延伸引物，合成新的 DNA 链。此时，荧光染料会结合到新合成的双链 DNA 上，仪器会在特定的时间点检测荧光信号的强度。随着循环次数的增加，荧光信号逐渐增强，当信号强度达到设定的阈值时，对应的循环数被称为阈值循环数（Ct 值）。定量依据：在一定的范围内，起始模板量与 Ct 值呈对数关系。即起始模板量越多，达到阈值所需的循环数越少，Ct 值越小；反之，起始模板量越少，Ct 值越大。通过已知浓度的标准品建立标准曲线，再根据待测样本的 Ct 值，就可以在标准曲线上计算出其对应的起始模板量。无锡CY3荧光定量PCR仪型号通过婚前或孕前筛查，能够评估夫妻双方生育患病子女的风险，为遗传咨询和生育指导提供重要信息。
荧光定量 PCR 仪的检测结果会受到多种因素的影响，包括仪器设备、试剂质量、样本处理以及实验操作等方面，以下是具体介绍：引物和探针：引物和探针的特异性、纯度及浓度对检测结果影响明显。若引物特异性不好，可能会与非目标序列结合，产生非特异性扩增，干扰目标基因的定量。探针的质量和标记效率也会影响荧光信号的强度和稳定性，进而影响检测的准确性。酶的活性：Taq 酶等聚合酶的活性和稳定性是保证 PCR 反应顺利进行的关键。酶活性过低会导致扩增效率低下，产量不足；而酶的稳定性差可能在反应过程中失活，使扩增反应中断，影响结果的重复性和准确性。反应缓冲液：反应缓冲液的成分和 pH 值等条件对 PCR 反应有重要影响。不合适的缓冲液条件可能影响酶的活性、引物与模板的结合以及 DNA 的稳定性，从而导致扩增效果不佳，检测结果不准确。
荧光定量PCR仪具有高灵敏度、高特异性和精确定量等特点，被广泛应用于多个行业，以下是一些主要的应用行业：生命科学研究行业基因表达分析：是研究基因表达调控的重要工具，可精确测定不同组织、不同发育阶段以及不同生理病理条件下基因的表达水平，有助于深入了解基因的功能和生物过程的分子机制。基因功能研究：通过对基因敲除、过表达或 RNA 干扰等模型中相关基因表达量的定量分析，验证基因的功能，揭示基因之间的相互作用关系。分子进化研究：分析不同物种或同一物种不同个体之间基因激发光源能够稳定且有效地激发 TET 荧光染料，使其发出足够强的荧光信号。
光学系统：包括光源、激发和发射滤光片、检测器等。光源提供激发荧光染料所需的能量，滤光片用于选择特定波长的光，检测器负责检测荧光信号的强度。如 ABI StepOne Plus 实时荧光定量 PCR 仪的光学系统能精确检测不同荧光染料发出的信号。热循环系统：用于控制 PCR 反应的温度变化，包括变性、退火和延伸等步骤。它需要具备快速升降温的能力，以保证 PCR 反应的高效进行。例如，Roche LightCycler 480 实时荧光定量 PCR 仪的热循环系统升温速度快，能有效缩短实验时间。控制系统：负责仪器的操作和数据处理，可设置 PCR 反应的参数，如循环次数、温度、时间等，还能对检测到的荧光信号进行分析和处理，生成定量结果。染料的纯度、荧光量子产率及与核酸的结合特性等很重要。镇江SYBR-Green荧光定量PCR仪厂家直销
强度高且稳定的光源能保证 TET 染料被充分激发，而高灵敏度、低噪声的探测器可准确捕捉微弱荧光信号。常州VIC荧光定量PCR仪
ROX原理：主要用于荧光定量 PCR 中的校正和归一化。在反应体系中，ROX 的荧光强度相对稳定，不受 PCR 反应过程的影响。通过检测 ROX 的荧光信号，可以对其他荧光染料的信号进行校正，消除由于加样误差、反应体积差异、仪器波动等因素引起的荧光信号变化，提高定量结果的准确性和可靠性。特点：激发波长约为 570nm，发射波长约为 590nm，荧光颜色为红色。ROX 通常与其他荧光染料如 FAM、VIC 等配合使用，在多重荧光定量 PCR 中，为每个反应孔提供一个稳定的内参荧光信号，以便对不同孔之间的荧光信号进行标准化处理。常州VIC荧光定量PCR仪
