数字PCR通过将一个样本分成几十到几万份,分配到不同的反应单元(微滴),包含一个或多个拷贝的核酸分子(也就是说我们所说的 DNA 模板) ,这是与PCR或qPCR反应比较大的区别,PCR或qPCR只在一个反应体系中进行,而数字PCR在每个反应单元(微滴)中都会对目标分子进行扩增,扩增结束后统计荧光信号并分析。是不是听起来特别高(yi)大(lian)上(meng)?举个栗子,PCR或qPCR检测突变像是在大海里捞一个会发光的针,周围都是海水,很难看到针的光在哪,而dPCR就像把海水盛到好多个碗里面,瞧一眼很容易就知道哪个碗在发光了,而且,系统还会数出来到底有多少个碗里是发光的,多少个碗里是没发光的,这样一比,不就很容易的知道有多少数量的突变,就能做到***定量了。
正压生成油包水的液滴。上海MicroDrop-100数字PCR原理


MicroDrop-100微滴式数字PCR是具有国内自主知识产权的第三代JUE对定量PCR系统,整套系统由MicroDrop-100A微滴生成仪、 MicroDrop-100B微滴检测仪以及结果数据分析设备等构成。系统通过自主设计的微流控芯片,利用油水相不兼容的原理,在2分钟时间内将PCR体系分割成100,000油包水的体系,每个体系为**的PCR反应体系,体积约为0.2nL,单次实验一次可生成8个样本的油包水体系。由于油包水体系的分割效应,使得数字PCR受PCRYi制物的影响相对较小,有利于复杂环境样本的实验操作。区别于荧光定量PCR的过程性判读方法,数字PCR结果判读为终点法,故其对PCR扩增效率的依赖也相对较小。
每种PCR方法对比如下:
|
数字PCR |
实时荧光定量PCR |
传统PCR |
|
|
概述 |
测量阴性平行样的比例以确定***拷贝数 |
在发生PCR扩增时进行测量 |
在PCR循环结束时测量积聚的PCR产物的量 |
|
是否定量 |
是,阴性PCR反应的比例适合泊松统计算法 |
是,因为在PCR的指数期内采集数据,在此期间PCR产物的数量与核酸模板量成正比 |
否,但是比较凝胶上的扩增条带的强度与已知浓度的标准品可进行半定量 |
|
应用 |
***载体***定量 核酸标准品***定量 下一代测序文库***定量 稀有等位基因检测 基因表达***定量 混合物富集和分类 |
基因表达定量 质量控制和检测验证 病原体检测 SNP基因分型 拷贝数变异 microRNA分析 ***定量 siRNA/RNAi实验 |
DNA扩增 基因分型 分子克隆 采用微滴式技术高达100,000个的微滴。 |

数字PCR为juedui定量,qPCR为相对定量,数字PCR较qPCR更精细、更灵敏。所以说,未来数字PCR将成为qPCR的重要补充,在部分领域逐步替代荧光定量PCR。
MicroDrop™数字PCR可广泛应用于科研、医疗、出入境检验检疫等领域。上海MicroDrop-100数字PCR原理
相对于二代测序、基因芯片和定量PCR而言,数字PCR具备以下优势:
· 能够有效区分浓度差异微小的样品:更好的准确度、精密度和重复性,可以用于精确测定靶基因的相对表达,基因拷贝数变异分析等。
· 数字PCR可开发针对不同**、不同样本以及不同的样本环境提供检测解决方案,该技术的应用范围广,尤其在液体活检领域,已开发针对肺*、乳腺*、肠*、胃*等上百个位点检测试剂盒,可精细指导临床***的诊断,以便患者在后续得到更及时并且适当的***方案提供。 上海MicroDrop-100数字PCR原理
浚和(上海)仪器有限公司成立于2018-10-09,是一家贸易型的公司。浚和致力于为客户提供质量的真空泵,喷雾干燥机,培养箱,等离子清洗机,一切以用户需求为中心,深受广大客户的欢迎。公司将不断增强企业重点竞争力,努力学习行业先进知识,遵守行业规范,植根于仪器仪表行业的发展。在社会各界的鼎力支持下,持续创新,不断铸造***服务经历,为客户成功提供坚实有力的支持。
无创产前检查镰状细胞贫血(sicklecellanemia)是HBB基因突变引起的常染色体显性遗传病,有严重的危害,可以导致高达5%的胎儿死亡率及4.62%的孕妇死亡率。而精细有效的无创产前诊断是预防镰状细胞贫血患儿出生的有效方法。研究人员采用dPCR技术检测孕妇胎儿游离DNA(cff-DNA)HBB基因突变。结果显示,dPCR技术能够确定87%的男性胎儿(n=45)和75%的女性胎儿(n=20)H BB基因的突变状态。当cff-DNA浓度大于7%时,可以**的检测出HBB基因突变[3],可以说是相当厉害了。数字PCR ,就选浚和(上海)仪器科技有限公司,有想法的可以来电咨询!黑龙江噪音小数字...