光源和检测方法(LIGHTSOURCESANDDETECTION)分光光度计的光谱也是需要考虑的一个重要因素。实验室研究人员希望省钱购入专门仪器定量核酸、蛋白或者细菌的生长情况。例如AmershamBiosciencesofPiscataway公司的GeneQuantII能在230、260、280、320、595和600nm的波长下测量样品。果果需要更大的灵活性,研究者可以考虑一种更高性能的宽光谱仪器,可以程序性地进行ELISAs分析和比色分析。
紫外分光光度计一般覆盖190nm和380nm波长,通常利用氘灯照明。一些特殊的仪器可以提供满足光子学和半导体研究需要的光谱范围。VarianofPaloAlto公司的CaryDeepUV和HitachiHighTechnologiesofTokyo的U-7000AutomatedVacuumUVSystem就是这样的仪器。
一些仪器具有多种光源供选择:紫外光、可见光和甚至红外光(780nm至3,000nm)。钨灯和卤素灯一般只覆盖可见光部分(大约380nm到800nm)。而氙灯则可以覆盖紫外光和可见光区域。紫外可见分光光度计应安装在太阳不能直接晒到的地方,以免“室光” 太强,影响仪器的使用寿命。水质紫外可见分光光度计厂家供应
综合评价紫外可见光分光光度计仪器:根据使用领域进行初步筛选,科研、制药领域注重选择光谱可调的紫外可见光分光光度计。其中,制药中药检仪器要符合药典规定,光谱带宽要求为2nm以下。
重要性能指标的考察,包括:光度准确度,杂散光,光谱带宽,稳定性,噪声,波长的准确度和重复性是几个重要指标。各指标间相互独立有相互影响,需要综合考量选购目标紫外可见光分光光度计。
使用前,阅读仪器使用说明书和做好仪器使用前的工程师培训。使用过程中,正确操作、认真了解仪器指标的物理意义和测试方法以及结合仪器使用中的相关设备的调试。掌握仪器的基本保养维护知识,建立相关指标与分析测试结果之间的误差影响条件,经常检测和调试仪器,确保仪器处在合适的工作状态。学校紫外可见分光光度计对比按所吸收光的波长区域不同,分为紫外分光光度法和可见分光光度法,合称为紫外-可见分光光度法。
紫外可见分光光度计使用中常见问题解析在一般分光光度计的使用说明书上,要求仪器预热时间约20分钟;若是带微处理器的分光光度计,开机后仪器自动进入自检(初始化)状态,约需1O分钟左右。在分光光度计预热这个环节上,很多使用者或多或少存在问题,如开机只预热电路系统(不调节波长、打开吸收池暗箱盖预热等)或认为初始化过程就是预热等等。对带微处理器有自检功能的分光光度计,开机后仪器自检(初始化)结束后,在测定窗口上,设置所需波长值,用一个吸收池装上纯净水置于光路上,调“0000A”后,预热仪器,当仪器显示读数不再变化后即可进行测定。
对于紫外可见分光光度计,由于有双光源(钨灯与氘灯),为了延长灯的使用寿命,开机自检完成后可以关掉测定时不用的光源灯。
掌握紫外可见光分光光度计基本工作原理:一定频率紫外可见光照射所需要分析的目标样品,引起目标样品中价电子发生跃迁,从而变现随着吸收波长变化而引起光谱变化,形成可供分析数据。
以朗伯-比耳定律(Lambert-beer)为理论基础,特定波长吸收中,吸收程度正比于试样成分浓度,因此,可进行光谱的定性分析。且根据吸收与已知浓度标样比较,能进行定量分析。
紫外可见光分光光度计种类及优缺点对比:传统机型:单光束UV、全程密闭、以光栅进行分光,标样和测试样品分别测试,全波段扫描时间至多2min;比例双光束UV:单光束UV,全程密闭、经光栅再经棱镜,全程密闭、标样和测试样品分别测试、测试灵敏度降低,全波段分析时间长。 分光光度计的氘灯和汞灯是在不同波长的时候有程序控制自动变换的,一般是在360nm处变换。
定性定量。利用特定的吸收峰,快速对待测样品进行定性和定量分析。如聚六亚甲基双胍盐酸盐的检测。利用双波长,以很快的速度辨别是单胍还是双胍,并进行粗略定量。这是液相色谱无论如何也做不到的。
测定透过率。透光率是一个物理词汇,是表示光线透过介质的的能力,是透过透明或半透明物体的光通量与其入射光通量的百分率。吸光度与透过率的换算公式
透过率对于某些原料检测是非常实用的,可对此类原料品质进行总体把控。
杂质的检测。通过前处理将杂质与主成分分离后,进行紫外分光光度测定,可很快得到该杂质的含量。以桑普实验室这十几年对苯氧乙醇中杂质苯酚的测定方法改进过程为例:
之后建立了4-氨基安替比林比色法,可实现对苯氧乙醇含量20、40、60、80、100ppm的区分;紫外分光光度法
期间同时采用EP中紫外分光光度法,并将其进行适当改进,作为修订后的企标。该方法便利快速,可实现50ppm以上的定量检测。HPLC-DAD
近两年,桑普对产品品质把控更严格,希望能实现几个ppm的定量检测。所以采用了HPLC-DAD作为企标对其检测。 在选择紫外可见分光光度计之前, 需要了解仪器的基础构架,有哪些地方是消耗品,有想哪些需要维修保养。学校紫外可见分光光度计排行
紫外可见分光光度计是实验室中出镜率相当高的分析仪器。水质紫外可见分光光度计厂家供应
自从60年前紫外分光光度计出现在实验室的工作台之后,已经形成了一种能解决大部分难题的仪器,从单一波长的测量到高性能多光谱的测量分析。实验室选择时需要根据自己实验室的需要和目的用途来考虑,光学构造和光源、探测方法、样品类型和数据处理等都是要考虑的因素。
光学构造(OPTICALCONFIGURATION)
一般来说,紫外光分光光度计分为单光束和双光束两类。顾名思义,单光束型主要是依赖单束光进行测量。一束给定波长的光通过对照物,然后再通过实际样品溶液,就能得到吸光结果。
双光束型则是通过一个斩光轮(mirroredchopperwheel)将一束光分成两束,分别测量对照样品和实际样品。可以MIN光漂移(lampdrift)和减少测量时间。一些双光型光度计不利用斩光轮,而是利用一种光束分光器来代替,将一束光分成两束平行的光然后同时测量对照样品和目的样品。因为增加了测量的速度,所以双光束分光光度计在测量一些溶液随时间动态变化的研究中大有用处。
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