南通广东数字PCR原理

       数字PCR为juedui定量，qPCR为相对定量，数字PCR较qPCR更精细、更灵敏。所以说，未来数字PCR将成为qPCR的重要补充，在部分领域逐步替代荧光定量PCR。

未来这些领域将广泛应用到数字PCR：

科研：高校（生命科学学院、环境学院、医学院、药学院）等。

医院：病理科、血液科、妇产科、心血管科、检验科、转化医学中心

：研究院单位、疾控中心、海关（出入境检验检疫）、质监局、环境/环保局等。

企业：第三方检测机构、IVD(分子体外诊断试剂)、生物制药等。 全封闭防污染设计，一键式自动化操作。南通广东数字PCR原理

       数字PCR检测及分析原理在上世纪90年代就被提出来了，但是无奈受限于当时的技术条件，样本稀释及分配都是靠手工来完成的，受到很多因素的干扰和限制；并且结果分析对于研究者来说也十分枯燥与繁琐，因此在很长一段时间dPCR发展停滞不前。后来由于微流控技术与微纳集成制造工艺的发展解决了dPCR过程中的几个关键技术问题，推动了dPCR的研究与商业化的发展。

       目前根据dPCR样本稀释分配的方式，基本可分为三大类，一种是基于大规模集成微流控芯片；第二种是使用微反应室/孔板；第三种是微滴式。但不论是走芯片式还是微滴式，其基本原理都是将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或者微滴当中，每个反应器的核酸模板数少于1或者等于1。经过PCR扩增之后，有一个核酸分子的模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，可以推算出原始溶液的核酸浓度。 南通广东数字PCR原理线性范围达到6个数量级，灵敏度低至万分之一。

       数字PCR是一种核酸分子***定量技术。当前核酸分子的定量有三种方法，光度法基于核酸分子的吸光度来定量；，Ct值就是指可以检测到荧光值对应的循环数；数字PCR是***的定量技术，基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量，是一种***定量的方法。主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法，将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。

dPCR的基本原理

       目前dPCR主要有两种形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。可以使用几种不同的方法来分配样品，包括微孔板，毛细管，油乳剂和带有核酸结合表面的小型化腔室阵列。样品的分配使人们可以通过假设分子种群遵循泊松分布来估计不同分子的数量，根据泊松分布的原理，反应体系中目标分子的拷贝数可以通过公式A=-ln[(N-X)/N]*N计算，从而解决了多个目标分子存在于单个液滴中的可能性。 能检测低至0.01%的突变基因。

相对于二代测序、基因芯片和定量PCR而言，数字PCR具备以下优势:

· 能够有效区分浓度差异微小的样品：更好的准确度、精密度和重复性，可以用于精确测定靶基因的相对表达，基因拷贝数变异分析等。

· 数字PCR可开发针对不同**、不同样本以及不同的样本环境提供检测解决方案，该技术的应用范围广，尤其在液体活检领域，已开发针对肺*、乳腺*、肠*、胃*等上百个位点检测试剂盒，可精细指导临床***的诊断，以便患者在后续得到更及时并且适当的***方案提供。 单次微滴生成*需2分钟。南通广东数字PCR原理

不依赖Ct值，无需标准曲线。南通广东数字PCR原理

       基因检测**前沿的两种方法是：高通量测序（NGS）和数字PCR (dPCR)。

       高通量测序技术又称“下一代”测序技术，可以一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，功能强大，但是实验操作较复杂，数据分析难度较大，检测周期长，成本较高。数字PCR技术是目前**精细**灵敏的基因检测技术，借助微液滴或微腔室，通过单个模板分子的PCR扩增，可实现不依赖于标准曲线和参照样本的***定量。与NGS相比，数字PCR灵敏度高、检测速度快、操作简便、结果易读、成本低廉等优势使其更适合临床检测，成为精细医疗实现平民化、大众化的比较好选择。    

       此外，数字PCR还在基因表达差异研究、拷贝数变异(CNV)研究、低丰度DNA模板分子的精确定量、甲基化含量鉴定、二代测序辅助建库、CRISPR-Cas9基因编辑结果验证、转基因成分的检测、移植排异监控、肠道菌群分析以及***基因组检测等众多领域中有着优异的应用。

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