Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。
步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供**适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太慢，可以加个恒流泵，但是一定不能太快，太快挂柱效果差，当然你也可以选择循环挂柱，就是恒流泵的一头接你装蛋白的烧杯，从柱子中留下来的液体还用同一个烧杯接回去。挂完之后，按理想来讲，你的蛋白在Ni柱中与Ni就结合了，杂蛋白多数在烧杯里，留下来了，当然肯定有少量杂蛋白也挂上了，这时候你要梯度洗脱，拿咪唑和你的buffer配，一般从0 20mM 40mM。。。。100mM这样洗脱（当你不知道你的蛋白大概在什么时候出来的时候）我指的是咪唑的终浓度。咪唑加入之后，会和蛋白争夺与Ni的结合位点，杂蛋白、你的目的蛋白，会在不同的浓度被洗脱下来，洗完之后，你可以用200mM咪唑洗柱子，清理一切蛋白，然后平衡几次，是否选择重生你自己定咯~然后放上20%乙醇保存柱子就可以咯~
过的蛋白用不同的管子收下，然后SDS-page检测在哪个管子里。
为什么要对蛋白质纯化？江苏专业蛋白纯化
通常，对某一特定蛋白质的分离纯化的步骤包括前处理、粗分级、细分级三步，下面就让小编带你了解一下。前处理：对于某种蛋白质的分离纯化，首先需要通过溶解的状态从原来的组织或细胞中释放出蛋白质并且使原来的天然状态保持不变，从而使生物活性不丢失生。之后，按照不同的情况，选择适当的方法，破碎掉组织和细胞。可以使用电动捣碎机或匀浆机破碎或超声波对动物组织和细胞进行处理破碎。如果所要的蛋白主要在如细胞核、染色体、核糖体或可溶性细胞质等某一细胞组分集中，那么可以通过差速离心的方法分开它们，对该细胞组分进行收集以作下步纯化的材料。如果所要蛋白是与细胞膜或膜质细胞器结合的，那么必须使用超声波或去污剂解聚膜结构，然后使用适当介质来提取。粗分离当获得蛋白质提取液（有时还杂有核酸、多糖之类）以后，选择合适的方法来分离所要的蛋白与其他杂蛋白。通常使用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法来进行这一步的分离。这些方法不但操作简单，而且能够处理很多，既可以将大量的杂质除去，又可以使蛋白溶液浓缩。一些蛋白提取液体积比较打，使用沉淀或盐析法浓缩又不适用，那么进行浓缩的方法可以是超过滤、凝胶过滤、冷冻真空干燥或其他方法。销售蛋白纯化哪家好分子筛层析蛋白纯化系统具有分子筛作用的物质很多，如浮石、琼脂、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。
细分离样品在进行粗分级分离以后，通常只有很小的体积，以及去除了绝大多数的杂蛋白大部分。通常使用包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等层析法来进行进一步纯化。作为***的纯化步骤选择包括区带电泳、等电点聚焦等电泳法也很有必要。蛋白质分离纯化的***步骤结晶，结晶过程不能够使蛋白一定是均一得到确保，然而只有在溶液中某种蛋白在数量上占有优势时才能有结晶形成。离子层析法当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析柱时，会在离子交换剂上吸附带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质，之后通过对pH进行改变等方法洗脱吸附的蛋白质。有机溶剂提取与水互溶的有机溶剂(如甲醇、乙醇)可以***降低一些蛋白质在水中的溶解度，并且...查看全文。
各种蛋白纯化方法及优缺点
蛋白沉淀蛋白能溶于水是因为其表面有亲水性氨基酸。在蛋白质的等电点处若溶液的离子强度特别高或特别低，蛋白则倾向于从溶液中析出。***铵是沉淀蛋白质**常用的盐，因为它在冷的缓冲液中溶解性好，冷的缓冲液有利于保护蛋白的活性。***铵分馏常用做纯化的第-步,它可以初步粗提蛋白质，去除非蛋白成分。蛋白质在***铵沉淀中较稳定，可以短期在这种状态下保存中间产物，当前蛋白质纯化多采用这种办法进行粗分离翻。在规模化生产上***铵沉淀方法仍存在一些问题 ，***铵对不锈钢器具的腐蚀性很强。其他的盐如***钠不存在这种问题，但其纯化效果不如***按。除了盐析外蛋白还可以用多聚物如PEG和防冻剂沉淀出来，PEG是一种惰性物质 ,同***铵一样对 蛋白有稳定效果,在缓慢搅拌下逐渐提高冷的蛋白溶液中的PEG浓度,蛋白沉淀可通过离心或过滤获得,蛋白可在这种状态下长期保存而不损坏。蛋白沉淀对蛋白纯化来说并不是多么好的方法，因为它只能达到几倍的纯化效果，而我们在达到目的前需要上干倍的纯化。其好处是可以把蛋白从混杂有蛋白酶和其他有害杂质的培养基及细胞裂解物中解脱出来。
蛋白质纯化有哪些方法，如何应用？
各种蛋白质在同一pH条件下，因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。值得重视的是等电聚焦电泳，这是利用一种两性电解质作为载体，电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度，当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时，到达各自等电点的pH位置就停止，此法可用于分析和制备各种蛋白质。2、离子交换层析法离子交换剂有阳离子交换剂（如：羧甲基纤维素；CM-纤维素）和阴离子交换剂（二乙氨基乙基纤维素；DEAE?FONTFACE="宋体"LANG="ZH-CN">纤维素），当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析柱时，带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上，随后用改变pH或离子强度办法将吸附的蛋白质洗脱下来。（四）根据配体特异性的分离方法－亲和色谱法亲和层析法（aflinitychromatography）是分离蛋白质的一种极为有效的方法，它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体(Ligand）的分子能特异而非共价地结合。其基本原理：蛋白质在**或细胞中是以复杂的混合物形式存在，每种类型的细胞都含有上千种不同的蛋白质，因此蛋白质的分离。 GST融合蛋白纯化的原理?上海全自动蛋白纯化费用
快速蛋白纯化系统的主要元部件特点有哪些？江苏专业蛋白纯化
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