高效液相色谱综述
HPLC的出现不过三十多年的时间,但这种分离分析技术的发展十分迅猛,应用十分***。其仪器结构和流程多种多样。典型的高效液相色谱仪结构和流程可用下列方框图表示(See Fig.3-4)。高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置(用双泵)、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。
高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质,因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂,抗氧化剂、杀虫剂、除锈剂的分析等物质的分析。
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高效液相色谱分离原理
离子对
(Ion Pair Chromatography)
离子对色谱法是将一种 ( 或多种 ) 与溶质分子电荷相反的离子 ( 称为对离子或反离子 ) 加到流动相或固定相中,使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物,从而控制溶质离子的保留行为。其原理可用下式表示:X水相Y-水相 === X Y-有机相
式中:X 水相--流动相中待分离的有机离子(也可是阳离子);Y-水相--流动相中带相反电荷的离子对(如氢氧化四丁基铵、氢氧化十六烷基三甲铵等);X Y---形成的离子对化合物。
当达平衡时:
KXY = [X Y-]有机相/[ X ]水相[Y-]水相
根据定义,分配系数为:
DX= [X Y-]有机相/[ X ]水相= KXY [Y-]水相
[讨论:DX与保留值的关系]
离子对色谱法(特别是反相)解决了以往难以分离的混合物的分离问题,诸如酸、碱和离子、非离子混合物,特别是一些生化试样如核酸、核苷、生物碱以及药物等分离。
高效液相色谱分离原理
离子
(Ion Chromatography)
用离子交换树脂为固定相,电解质溶液为流动相。以电导检测器为通用检测器,为消除流动相中强电解质背景离子对电导检测器的干扰,设置了***柱。试样组分在分离柱和***柱上的反应原理与离子交换色谱法相同。
以阴离子交换树脂(R-OH)作固定相,分离阴离子(如Br-)为例。当待测阴离子Br-随流动相(NaOH)进入色谱柱时,发生如下交换反应(洗脱反应为交换反应的逆过程):
***柱上发生的反应:
R-H Na OH- === R-Na H2O
R-H Na Br- === R-Na H Br-
可见,通过***柱将洗脱液转变成了电导值很小的水,消除了本底电导的影响;试样阴离子Br-则被转化成了相应的酸H Br-,可用电导法灵敏的检测。
离子色谱法是溶液中阴离子分析的比较好方法。也可用于阳离子分析。
整机兼具一体式系统的耐用性和模块化系统的灵活性、便于维修。
赛默飞高效液相色谱业务副总裁兼总经理Fraser McLeod表示:“在整个生物制药的流程中,从药物研发到质控的批次放行,数据完整性对于决策是必不可少的。为快速获取可靠结果,灵敏度和通量非常关键。我们开发出的这套系统展示出在复杂分析应用时的**辨分离和重复性。”
• Vanquish Flex UHPLC系统采用独特设计,即便在高通量的情况下,仍可以保证分析物色谱峰拥有尖锐峰形,实现在较短时间内分析更多样品。该系统良好的稳定性和重复性为数据质量提供了可靠保障,确保能够分析大量的样品,以供质控分析比较。其重要特点如下:
• 新型四元梯度泵模块,设计稳健,性能良好,保证高通量的前提下依然可提供方法开发的灵活性。
• 泵比较大耐压 1000 bar,性能***,流速高达 8 mL/min,应用灵活,可实现**辨分离。
• 新型荧光检测器模块灵敏度高,与高灵敏度、宽线性范围的UV、DAD检测器和针对非挥发性化合物的电雾式检测器互为补充。
可支持三个工作流程。双梯度流路。同一集成式系统。山西进口液相色谱系统厂家直销
一套设备可以同时实现在线分析与离线柱平衡再生,提升检测器或质谱在线利用率。江苏液相色谱系统供应商
高效液相色谱分离原理
离子交换
(Ion-exchange Chromatography)
IEC是以离子交换剂作为固定相。IEC是基于离子交换树脂上可电离的离子与流
动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换,依据这些离子以交换剂具有不同的亲和力而将它们分离。以阴离子交换剂为例,其交换过程可表示如下:
X-(溶剂中) (树脂-R4N Cl-)=== (树脂-R4N X-) Cl- (溶剂中)
当交换达平衡时:
KX=[-R4N X-][ Cl-]/[-R4N Cl-][ X-]
分配系数为:
DX=[-R4N X-]/[X-]= KX [-R4N Cl-]/[Cl-]
[讨论:DX与保留值的关系]
凡是在溶剂中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法来进行分离。
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