世界多光子激光扫描显微镜产业主要布局在德国和日本,德国是以徕卡显微系统和蔡司为,而日本以尼康和奥林巴斯公司为,2020年,上述企业占据着世界多光子激光扫描显微镜市场 64.44%的市场份额,其发展战略左右着多光子激光扫描显微镜市场的走向。目前世界市场对多光子激光扫描显微镜的需求在增长,中国市场这方面的需求增长更快,未来五年多光子激光扫描显微镜市场的发展在中国将具有很大的发展潜力。国内显微镜制造市场目前断层严重。目前我国显微镜行业发展缺乏技术沉淀,20 年以上经营积累的企业十分稀缺,深度精密制造、光学重要部件设计及工艺严重制约产业升级。目前中国显微镜中如多光子显微镜、共聚焦扫描和电子显微镜等主要集中在徕卡显微系统、蔡司、尼康、奥林巴斯等国外企业。国内具备生产显微镜能力的企业屈指可数,若国内显微镜企业能打破技术壁垒,切入显微镜市场,企业的生产经营将腾跃至一个更高的格局。未来国产多光子激光扫描显微镜替代空间大。美国清醒动物多光子显微镜能量脉冲
快速光栅扫描有多种实现方式,使用振镜进行快速2D扫描,将振镜和可调电动透镜结合在一起进行快速3D扫描,但可调电动透镜由于机械惯性的限制在轴向无法快速进行焦点切换,影响成像速度,现可使用空间光调制器(SLM)代替。远程聚焦也是一种实现3D成像的手段,如图2所示。在LSU模块中,扫描振镜进行横向扫描,ASU模块包括物镜L1和反射镜M,通过调控M的位置实现轴向扫描。该技术不仅可以校正主物镜L2引入的光学像差,还可以进行快速的轴向扫描。想要获得更多神经元成像,可以通过调整显微镜的物镜设计来扩大FOV,但是具有大NA和大FOV的物镜通常重量较大,无法快速移动以进行快速轴向扫描,因此大型FOV系统依赖于远程聚焦、SLM和可调电动透镜。美国激光扫描多光子显微镜成像区域多光子激光扫描显微镜更能解决生物组织中深层物质的层析成像问题, 扩大了应用范围。
双光子荧光显微成像主要有以下优点∶a.光损伤小∶双光子荧光显微镜使用可见光或近红外光作为激发光,对细胞和组织的光损伤很小,适合于长时间的研究;b.穿透能力强∶相对于紫外光,可见光或近红外光具有很强的穿透性,可以对生物样品进行深层次的研究;c.高分辨率∶由于双光子吸收截面很小P,只有在焦平面很小的区域内可以激发出荧光,双光子吸收局限于焦点处的体积约为λ范围内;d.漂白区域很小,焦点以外不发生漂白现象。e.荧光收集率高。与共聚焦成像相比,双光子成像不需要光学滤波器,提高了荧光收集率。收集效率提高直接导致图像对比度提高。f.对探测光路的要求低。由于激发光与发射荧光的波长差值加大以及自发的三维滤波效果,多光子显微镜对光路收集系统的要求比单光子共焦显微镜低得多,光学系统相对简单。g.适合多标记复合测量。许多染料荧光探针的多光子激发光谱要比单光子激发谱宽阔,这样,可以利用单一波长的激发光同时激发多种染料,从而得到同一生命现象中的不同信息,便于相互对照、补充。
多束扫描技术可以同时对神经元组织的不同位置进行成像该技术:对两个远距离(相距大于1-2 mm)的成像部位,通常使用两条单独的路径进行成像;对于相邻区域,通常使用单个物镜的多光束进行成像。多光束扫描技术必须特别注意激发光束之间的串扰问题,这个问题可以通过事后光源分离方法或时空复用方法来解决。事后光源分离方法指的是用算法来分离光束消除串扰;时空复用方法指的是同时使用多个激发光束,每个光束的脉冲在时间上延迟,这样就可以暂时分离被不同光束激发的单个荧光信号。引入越多路光束就可以对越多的神经元进行成像,但是多路光束会导致荧光衰减时间的重叠增加,从而限制了区分信号源的能力;并且多路复用对电子设备的工作速率有很高的要求;大量的光束也需要更高的激光功率来维持近似单光束的信噪比,这会容易导致组织损伤。多光子显微镜销售渠道分析及建议。
继首代小型化双光子显微镜在国际上获得小鼠自由行为过程中大脑神经元和突触的动态图像后,我们成功研制了第二代小型化双光子显微镜。它具有更大的成像视野和三维成像能力,可以清晰稳定地对自由活动小鼠三维脑区的数千个神经元进行成像,实现对同一批神经元的一个月追踪记录。通过对微光学系统的重新设计系统的。微物镜工作距离延长至1mm,实现无创成像。内嵌可拆卸的快速轴向扫描模块,可采集深度180微米的3D体成像和多平面快速切换的实时成像。该扫描模块由一个快速的电动变焦透镜和一对中继透镜组成,在不同深度成像时可保持放大倍率恒定。其变焦模块重量,研究人员可根据实验需求自由拆卸。此外,新版微型化成像探头可整体即时拔插,极大地简化了实验操作,避免了长周期实验时对动物的干扰。在重复装卸探头同一批神经元时,视场旋转角小于,边界偏差小于35微米。 光子显微成像技术不是什么新技术,早在20多年前就有了,目前已经在生命科学和材料科学中广泛应用。美国清醒动物多光子显微镜能量脉冲
多光子显微镜技术的优势如何?又有哪些应用?美国清醒动物多光子显微镜能量脉冲
多光子激发的特点。激发波长∶两个或多个光子同时激发,激发波长是单光子激发波长的两倍或多倍(i.e.红光能激发UV探针)。多光子激发∶依赖于多个光子同时到达的时间。使用脉冲飞秒激光器(i.e.10-16 seconds),且能提供更高的峰值功率。荧光限制在焦点处,能满足多个光子同时达到产生多光子吸收。荧光强度正比于(激光强度)n。为什么使用飞秒激光器?多光子激发需要超快的激光器,皮秒脉冲不能实现三光子激发。深度成像需要更高、更窄脉冲输出功率。多光子激发光源处于近红外区,对细胞毒性和光漂白更小。美国清醒动物多光子显微镜能量脉冲