紫外分光光度法是根据物质的吸收光谱,来研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。紫外分光光度计可以在紫外可见光区任意选择不同波长的光。物质的吸收光谱就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量,相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构,其吸收光能量的情况也就不会相同,因此,每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线,可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量。仪器的灵敏度是指仪器区别具有微小差异浓度分析物能力的度量。工厂紫外可见分光光度计代理
原子荧光分析法。气态自由原子吸收特征波长的辐射后,原子的外层电子从基或低能态跃迁到高能态,约经10-8S,又跃迁至基态或低能态,同时发射出与原激发长相同或不同的辐射,称为原子荧光。波长在紫外和可见光区。在与激发光源成一定角度(通常为90。)的方向测量荧光的强度,可以进行定量分析。原子吸收光谱分析法。利用待测元素气态原子对共振线的吸收进行定量测定的方法。其吸收机理是对共振线的吸收导致原子的外层电子能级跃迁,所吸收波长在紫外、可见和近红外区。紫外分光光度分析法此法是利用溶液中分子吸收紫外光而产生跃迁所记录的吸收光谱图,可进行化合物结构分析,根据比较大吸收波长强度变化可进行定量分析。可见分光光度分析法此法是利用溶液中分子吸收可见光产生跃迁所记录的吸收光谱图,可进行化合物结构分析,根据比较大吸收波长强度变化可进行定量分析。 国内紫外可见分光光度计选择一般连续光源主要用于分子吸收光谱法。
一般地,紫外可见分光光度计主要由光源系统、单色器系统、样品室、检测系统组成,如图1所示。光源发出的复合光通过单色器被分解成单色光,当单色光通过样品室时,一部分被样品吸收,其余未被吸收的光到达检测器,被转变为电信号,经电子电路的放大和数据处理后,通过显示系统给出测量结果。仪器的软件功能可以极大地提升仪器的使用性能和价值,现代分光光度计生产厂商都非常重视仪器配套软件的开发。除了仪器控制软件和通用数据分析处理软件外,很多仪器针对不同行业应用开发了**分析软件,给仪器使用者带来了极大的便利。
紫外可见分光光度计等光谱分析仪器的主要部件:样品容器不同的光谱仪中,样品容器的结构差异较大,在反射光谱仪中甚至没有专门的样品容器,在吸收光谱中,样品容器也称为吸收池。吸收池一般由光透明的材料制成。在紫外光区,采用石英材料;可见光区,则用硅酸盐玻璃;红外光区,则可根据不同的波长范围选用不同材料的晶体制成吸收池的窗口。检测器检测器是将一种类型的信号转变成另一种类型的信号的器件,如在分光光度计中的光电管,是将光能转变成电能的元件。检测器可分为两类,一类对光子有响应的光检测器,另一类为对热产生响应的热检测器。光检测器有硒光电池、光电管、光电倍增管、半导体等。热检测器是吸牧辐射并根据吸收引起的热效应来测量人射的强度,包括真空热电偶、热释电检测器等。 性范围是指从定量测定的较低浓度扩展到校正曲保持线性浓度的范围。
一般来说,紫外光分光光度计分为单光束和双光束两类。顾名思义,单光束型主要是依赖单束光进行测量。一束给定波长的光通过对照物,然后再通过实际样品溶液,就能得到吸光结果。双光束型则是通过一个斩光轮(mirroredchopperwheel)将一束光分成两束,分别测量对照样品和实际样品。可以很小化光漂移(lampdrift)和减少测量时间。一些双光型光度计不利用斩光轮,而是利用一种光束分光器来代替,将一束光分成两束平行的光然后同时测量对照样品和目的样品。因为增加了测量的速度,所以双光束分光光度计在测量一些溶液随时间动态变化的研究中大有用处。分光光度计的光谱也是需要考虑的一个重要因素。实验室研究人员希望省钱购入专门仪器定量核酸、蛋白或者细菌的生长情况。例如AmershamBiosciencesofPiscataway公司的GeneQuantII能在230、260、280、320、595和600nm的波长下测量样品。果果需要更大的灵活性,研究者可以考虑一种更高性能的宽光谱仪器,可以程序性地进行ELISAs分析和比色分析。 紫外可见分光光度计的日常维护:温度和湿度是影响仪器性能的重要因素。专业紫外可见分光光度计销售厂家
紫外光区通常用氢灯或氘灯,可见光区通常用钨灯或卤钨灯。工厂紫外可见分光光度计代理
在一般分光光度计的使用说明书上,要求仪器预热时间约20分钟;若是带微处理器的分光光度计,开机后仪器自动进入自检(初始化)状态,约需1O分钟左右。在分光光度计预热这个环节上,很多使用者或多或少存在问题,如开机只预热电路系统(不调节波长、打开吸收池暗箱盖预热等)或认为初始化过程就是预热等等。对带微处理器有自检功能的分光光度计,开机后仪器自检(初始化)结束后,在测定窗口上,设置所需波长值,用一个吸收池装上纯净水置于光路上,调“0000A”后,预热仪器,当仪器显示读数不再变化后即可进行测定。对于紫外可见分光光度计,由于有双光源(钨灯与氘灯),为了延长灯的使用寿命,开机自检完成后可以关掉测定时不用的光源灯。工厂紫外可见分光光度计代理
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