深圳正规鼠尾胶原厂家

使用方法：1、细胞培养器皿的表面包被：以包被浓度为2μg/cm2为例，用无菌0.006mol/L乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/mL。加到相应的培养器皿中，确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面。开盖在超净台上过夜晾干，也可以在室温放置1小时后，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三个月以上的时间。2、三维胶原凝胶的制备：A、无细胞三维胶原凝胶的制备（以配制1mg/mL三维胶1mL为例）将200μL本品加到置于冰浴的离心管中，加入690μL双蒸水，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反过来把12μL0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入100μL10×PBS或10×培养液，混匀后立即加到培养器皿中（混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要测定pH值）。将培养器皿在室温放置20min待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。深圳正规鼠尾胶原厂家

鼠尾胶原胶凝程序：胶原蛋白I按以下步骤使其pH达到碱性时凝胶。1）将无菌5cm左右的纱布海绵贴在150mm培养皿的盖子上来制备氨蒸气室。用氢氧化铵使纱布饱和，把盖子放在150mm的培养皿上，暂放置一边。2）将胶原蛋白I均匀涂布在要包被物的表面上，厚度可以根据需要改变，胶原蛋白I（50-100μL）足以涂覆22mm的盖玻片。对于直径100mm的培养皿，每个加入约6mL;对于60mm培养皿添加约2.3mL，对于35mm培养皿添加约1mL。3）将涂有胶原蛋白的盖玻片或带有盖子的培养皿转移到氨蒸气室并暴露三分钟。4）在无菌蒸馏水中（35mm培养皿加5mL，60mm培养皿加10mL等）浸泡涂布的盖玻片或培养皿30min。吸取原蒸馏水并加0.5-1.0mL无菌蒸馏水，放置在层流罩中过夜。5）吸出蒸馏水，用含血清的平衡盐缓冲液溶液代替并保存在2-8°C。济南鼠尾胶原厂家直销鼠尾胶原醋酸溶解：制备成浓度为0.1%的溶液。

鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用说明：含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。将200ul鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入23ul10×PBS或10×培养液，混匀(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。

鼠尾Ⅰ型胶原：材料与方法：1.主要材料、试剂和仪器鼠尾、盐酸、等渗氯化钠溶液、钙液、磷液均购自上海晶纯生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司)；多功能粉末X射线衍射仪。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型胶原蛋白取大鼠尾巴洗净，用75%的乙醇浸泡5min。将尾巴剪开，去掉皮毛，并剪成小段，抽出银色的肌腱。将肌键剪断置于平皿中，用无菌等渗氯化钠溶液浸泡。吸去等渗氯化钠溶液，将肌键置于平皿中剪碎，按每克肌键50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。摇晃，将肌键分散于醋酸溶液中，4℃放置一周，然后以2186×g离心20min。在醋酸溶液的酸解下，肌腱水解成胶冻状凝胶，置于冰箱4℃保存。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三个月以上的时间。

鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项：通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿，培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶，模拟真实的生长环境，使细胞在三维环境中生长。1，在使用鼠胶原蛋白型包被的细胞培养皿中检查到PC-12细胞的贴壁和生长。1mg/ml浓度以上，pH左右时可形成具有一定强度的三维胶，检查到NIH-3T3细胞在三维胶内正常生长、PC-12细胞在三维胶表面正常生长。使用方法：1、细胞培养器皿的表面包被推荐浓度：1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格体积加到相应的培养器皿中。制作鼠尾胶原,并观察利用自制的鼠尾胶原所培养出大鼠耳蜗边缘细胞的效果。杭州石家庄鼠尾胶原

免疫组织化学结果和扫描电镜证实所培养的细胞具有典型的分泌上皮细胞特征。深圳正规鼠尾胶原厂家

胶原蛋白的应用：1.胶原天然的紧密的纤维结构，使胶原材料显示出很强的韧性和强度，适用于薄膜材料的制备；2.大较胶原被用作制造肠衣等可食用包装材料．其独特之处是：在热处理过程中．随着水分和油脂的蒸发和熔化．胶原几乎与肉食的收缩率一致。而其他的可食用包装材料还没被发现具有这品质；3.由于胶原分子链上含有大量的亲水基团．所以与水结合的能力很强．这一性质使胶原在食品中可以用作填充剂和凝胶；4.胶原在酸性和碱性介质中膨胀，这一性质也应用于制备胶原基材料的处理工艺中。深圳正规鼠尾胶原厂家