温州昆明无血清细胞冻存液

细胞冻存液的配制可选用10%的DMSO加上90%的小牛血清，可以现用现配。除了这个方式，还可选择20%的DMSO机上80%的小牛血清，配成两倍的储存液，在使用时细胞悬液和冻存液按照1:1的比例混匀使用，特别的方便。冻存液可直接置于-20摄氏度的环境中保存。使用细胞冻存液需要注意以下几点：1、在使用冻存液前，需要确保细胞冻存液已经完全融化，并要轻轻的混匀。对融化后的细胞冻存液要置于4℃的环境中保存。2、使用冻存液之前应该确保冻存前的细胞生长情况比较良好，比如说细胞需要处于对数生长期，并且冻存的时候存活率大于90%。3、在使用细胞冻存液期间，为了保证可以发挥较佳的效果，建议将细胞冻存在液氮之中，这样可以长时间的进行保存。如果说将细胞置于-80℃的环境下保存，那么保存的时间大约为1年。4、细胞冻存液如果需要做标记的话，要使用耐受有机溶剂的马克笔进行标记，以防被酒精或异丙醇等擦掉，不能辨识。无血清冻存液特性：适合各种动物细胞。温州昆明无血清细胞冻存液

细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。为什么要进行细胞冻存？连续培养的细胞系容易发生遗传漂变，有限细胞系较终会发生衰老，所有培养的细胞都易受到微生物污染，即使运转情况较好的实验室也会遇到设备故障的问题。由于已建立的细胞系是一种宝贵资源，更换细胞系成本高昂，而且耗费时间，因此，十分有必要将细胞冷冻起来长期保存。除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞芜湖重庆无血清细胞冻存液无血清细胞冻存液的优势：可培养板整板冻存，例如杂交瘤细胞冻存时可节省筛选过程。

无血清细胞冻存液的使用方法及注意事项：1.将分装好的细胞冻存管，直接置于-80度冰箱过夜保存，次日投入液氮中保存即可备注：1、冻存过程中，第2步在冰袋附近操作时，低温避免保护剂对细胞造成损伤。2、细胞冻存管一定要保证完全密封，否则在复苏过程中有可能会炸（1）提前开启水浴锅，温度调节到37（2）将冻存的细胞冷冻管从液氮中取出，迅速置于水浴锅中融化，尽量1min融化，时间越短，对细胞影响越小。（3）将融化后的含细胞的冷冻保存液迅速析出置于新鲜培养基中充分混匀，（如细胞冷冻保存液为500ul，则加入到5ml新鲜培养基中，如细胞冷冻保存液位1ml，则加入10ml新鲜培养基中。）（4）混匀后立即离心，800转，3min即可离心结束后弃上清，加入预温的新鲜培养液。（5）混匀后分瓶置于二氧化碳培养箱中培养。（二氧化碳浓度根据培养基要求决定，通常为5%【注意事项】细胞系冻存密度备注正常人成纤维细胞1～310cells/ml杂交瘤细胞1～310cells/ml某些hybridoma会因冷冻浓度太高而在解冻24小时后死去。

无血清细胞冻存液与含血清细胞冻存液对比：传统的细胞冻存液是使用培养基、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%，统称为含血清细胞冻存液。含血清细胞冻存液的一般的冻存方法是梯度降温冻存法，如先将冷冻管置于4℃冰箱10分钟，然后移至-20℃冰箱30分钟，再移至-80℃冰箱保存16-18个小时（或隔夜），较后才移至液氮罐中进行长期的储存。可见，含血清细胞冻存液冻存细胞时遇到的问题：1.冻存细胞时需现配冻存液(如购买市面上通用的含血清细胞冻存液，此步可省略)。2.需要程序降温（4℃→-20℃→-80℃→液氮），步骤繁琐，耗时耗力。3.含血清，细胞污染(病毒、霉菌和支原体等)的风险更高。4.血清批次、品质间差异导致冻存液的批次间差异。5.需液氮冻存，且不能原位（如孔板）冻存。无血清细胞冻存液的优势：即用型，无需现配，直接将细胞悬浮于冻存液中即可。

细胞冻存及复苏的基本原则是“慢冻快融”，这样可以较大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多用二甲基亚砜（DMSO）作为保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性；缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少冰晶对细胞的物理损伤。复苏细胞采用快速融化的方法可以保证细胞外结晶在很短的时间内融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。血清完全细胞冻存液，通用于各种动物细胞株。特别配方有效提高细胞存活率和活力。不含动物来源性蛋白，能减少各类病毒、霉菌和支原体等污染，确保冻存细胞安全。适合用于无血清培养细胞和蛋白表达细胞。无血清细胞冻存液的优势：通用型，适用于冻存各种细胞系、原代细胞。唐山正规无血清细胞冻存液进货价

无血清细胞冻存液使用方法：按照常用方法收集悬浮细胞或贴壁细胞于试管中。温州昆明无血清细胞冻存液

细胞冻存液的操作步骤：1.配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的冻存细胞培养液;2.取对数成长期的体细胞，除去旧细胞培养液，用PBS清理。3.除去PBS，添加适量蛋白酶(遮盖细胞培养皿表层)把单面生长发育的体细胞消化吸收出来;4.抽滤1000rpm，5min;5.除去蛋白酶，添加适量配置好的冻存细胞培养液，用塑料吸管轻轻地吹打使体细胞匀称，记数，调整冻存液中体细胞的较后相对密度为5牙周106/ml～1牙周107/ml;6.将体细胞分装进冻存管中，每管1～1.5ml;7.在冻存管上标出体细胞的名字，冻存时间及作业者;8.冻存：标准的冻存程序流程为减温速度-1～-2℃/min;当温度达-25℃下列时，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃时，则可快速渗入液态氮中。也可将配有体细胞的冻存管放进-20℃电冰箱2h，随后放进-70℃电冰箱中留宿，取下冻存管，移进液氮容器内。温州昆明无血清细胞冻存液