用亚甲基蓝溶液染色后，被染为深蓝色的部分是（细胞核）亚甲基蓝可以结合核酸，使细胞核呈蓝色。 台盼蓝能使死细胞着色机理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中较常用的死细胞鉴定染色方法之一。固体试剂的取用:直接倾倒时瓶口必须紧挨试管口，试管45度，并且缓缓地倒。乳酚油
氨苄青霉素溶液配置：组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素。配制量 50ml。配制方法：1．称取5g Ampicillin置于50ml塑料离心管中。2．加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。3．0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml/管）后，置于－20℃保存。氨苄青霉素为白色晶体或粉末，分子式是C16H19N3O4S,分子量为349.41。溶于稀酸和稀碱，微溶于水和甲醇，几乎不溶于氯仿、96%乙醇、、乙酸乙酯和固定油。无臭，味苦。抗革兰氏阳性及阴性菌，用于分子生物学和组织培养（防止微生物污染和抗性筛选）。细胞核悬浮基液(NSM,PH7.4)检测试剂盒太屡次的洗刷会下降信号强度。
DC细胞诱导：1) 将收集的PBMC在1640培养基，在37 ℃、5 % CO2条件下在培养板培养4h。2) 轻轻吸取上清，收集贴壁细胞，加入含15%血清，100ng/ml rhGM-CSF、100ng/ml rhIL-4的1640培养基，培养5～7d获得未成熟DC，用25ng/ml hTNF-α刺激2～3天，获得成熟DC。3) 用倒置显微镜观察细胞形态，至细胞毛刺样突起，有典型DC形态悬浮细胞。注意事项：细胞较好在细胞贴壁注：分离后细胞较好在贴壁后当天换液（贴壁细胞贴壁能力很弱，润洗时轻柔），过夜后部分细胞漂浮，细胞得率减少。
从试剂瓶取用试剂，用左手持量筒（或试管），并用大姆指指示所需体积刻度处。右手持试剂瓶（注意：试剂标签应向手心避免试剂沾污标签），慢慢将液体注入量筒到所指刻度。读取刻度时，视线应与液体凹面的低处保持水平。倒完后，应将试剂瓶口在容器壁上靠一下，再将瓶子竖直，以免试剂流至瓶的外壁。如果是平顶塞子，取出后应倒置桌上，如瓶塞顶不是扁平的，可用食指和中指（或中指和无名指）医学教育|网搜集整理将瓶塞夹住（或放在洁净的表面皿上），切不可将它横置桌上。取用试剂后应立即盖上原来的瓶塞，把试剂瓶放回原处，并使试剂标签朝外，应根据所需用量取用试剂，不必多取，如不慎取出了过多的试剂，只能弃去，不得倒回或放回原瓶。以免沾污试剂。用无菌吸管吸掉上层血浆和血小板，不要碰到单个核细胞层。
检测试剂盒操作注意事项：实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。所有液体组分使用前充分摇匀。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀检测试剂盒里的各种成份及样品。BMC原代分离步骤：小心吸取中间呈白膜状的单个核细胞层，尽量全部吸出单个核细胞。蔗糖溶血检测试剂盒(比色法)
杀灭曲线的建立：按照20-25%的细胞密度将未转化的细胞铺在合适的培养板上。乳酚油
注意事项：1.全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得较佳的实验结果，较好在取样 2h内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。样品放置超过 6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。2.本实验较好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离 心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面 会变成毛面，影响细胞分离效果。3.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒 细胞数量增加。4.分离液用量大于组织单细胞悬液样本时，分离效果更佳。乳酚油
