科研实验中试剂取用应注意事项:1. 固体试剂的取用:取用固体药品时药匙必须是干净的.一支药匙不能同时取用两种或两种以上的试剂.药匙每取完一种试剂后都必须用干净的纸擦拭干净,以备下次使用.药匙的两端为大小两匙,取固体量较多时用大匙,较少时用小匙。2. 取用不定量(较多)液体——直接倾倒a. 瓶塞必须倒放在桌面上【防止药品腐蚀实验台或污染药品】;b. 直接倾倒时瓶口必须紧挨试管口,试管45度,并且缓缓地倒【防止药液损失】;c. 贴标签的一面必须朝向手心处【防止药液洒出腐蚀标签】;d. 倒完液体后,要立即盖紧瓶塞,并把瓶子放回原处,标签朝向外面【防止药品潮解、变质】。检测试剂盒操作注意事项:实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。尿亚硝酸盐定性试验试剂(Griess试剂)
从试剂瓶取用试剂,用左手持量筒(或试管),并用大姆指指示所需体积刻度处。右手持试剂瓶(注意:试剂标签应向手心避免试剂沾污标签),慢慢将液体注入量筒到所指刻度。读取刻度时,视线应与液体凹面的低处保持水平。倒完后,应将试剂瓶口在容器壁上靠一下,再将瓶子竖直,以免试剂流至瓶的外壁。如果是平顶塞子,取出后应倒置桌上,如瓶塞顶不是扁平的,可用食指和中指(或中指和无名指)医学教育|网搜集整理将瓶塞夹住(或放在洁净的表面皿上),切不可将它横置桌上。取用试剂后应立即盖上原来的瓶塞,把试剂瓶放回原处,并使试剂标签朝外,应根据所需用量取用试剂,不必多取,如不慎取出了过多的试剂,只能弃去,不得倒回或放回原瓶。以免沾污试剂。EB溶液(10mg/ml)pH缓冲溶液有何用途:pH测量前标定校准pH计。
弱酸-弱碱型缓冲溶液的构成与配制。这类缓冲溶液的组成为:弱酸+弱酸盐(即共轭碱)、弱碱+弱碱盐(即共轭酸)。常见的实例有:HAc-NaAc、HAc-NH4Ac(微酸性)、NH4Cl-NH3.这类缓冲溶液的实验室配制方法一般是根据溶液组成和浓度要求,直接称取或量取弱酸、弱酸盐溶液或弱碱、弱碱盐溶液来配制。其实,这类缓冲溶液还可以用强酸与弱碱、强碱与酸来配制,归纳起来,应该有三种配制方法:(1)弱酸+弱酸盐,弱碱+弱碱盐例如,HAc-NaAc、NH4Cl-NH3(2)弱酸(过量)+强碱(适量),弱碱(过量)+强酸(适量)例如,HAc(过量)-NaOH(适量)、NH3(过量)-HCl(适量)。这类缓冲溶液需要的共轭碱(NaAc)或共轭酸(NH4Cl)是通过反应后产生的。(3)弱酸盐(过量)+强酸(不足量)或弱碱盐(过量)+强碱(不足量)例如,NaAc(过量)+HCl(适量),NH4Cl(过量)+NaOH(适量)缓冲溶液需要的弱酸(HAc)或弱碱(NH3)则通过反应后产生。
氨苄青霉素溶液配置:组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素。配制量 50ml。配制方法:1.称取5g Ampicillin置于50ml塑料离心管中。2.加入40ml灭菌水,充分混合溶解之后定容至50ml。3.0.22μm滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管)后,置于-20℃保存。氨苄青霉素为白色晶体或粉末,分子式是C16H19N3O4S,分子量为349.41。溶于稀酸和稀碱,微溶于水和甲醇,几乎不溶于氯仿、96%乙醇、、乙酸乙酯和固定油。无臭,味苦。抗革兰氏阳性及阴性菌,用于分子生物学和组织培养(防止微生物污染和抗性筛选)。磷酸缓冲盐溶液可以破坏生物蛋白的结构及生物特性。
G418溶液是什么:G418(G418,G 418,G-418,Geneticin)是一种氨基糖苷类 ,这种氨基糖类的结构和新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似,在分子遗传试验中,是稳定转染常用的抗性筛选试剂。它通过克制转座子Tn601,Tn5的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生东西,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA ,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的表达 ,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。G418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以普遍应用。溶液配制:G418溶液配制时,一般溶于水配成50mg/ml的原液,使用时再稀释使用。在筛选菌类和藻类时,一般用5mg/l 的浓度或者更低。筛选哺乳动物细胞是大可400mg/l的浓度。检测试剂盒变质的原因:样本因素。茜素红S染色液(0.1%,pH4.2)
校准液标示值往往是按其基质偏差修正的,所以标示值并非实际值。尿亚硝酸盐定性试验试剂(Griess试剂)
培养方法:1.体外分离获得瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes, TIL)。2.活化阶段:用培养液调节成1*106/ml接种于孔板中,加入IL-2(1000U/ml),在37℃,5%CO2条件下培养。注:一般培养的初期(7天左右)细胞无明显生长,为生长克制期。由于瘤本身固有的生物学特性、瘤抗原性及淋巴细胞浸润程度等,体外增殖前期会受到不同程度的克制;前期需尽快去除瘤细胞,如重量沉降法及贴壁去除法等,需具体情况具体分析。(前期处理有学者采用PHA、胰岛素、胰素等不同方法刺激)3.增殖阶段:细胞增殖到107后,用CD3单抗(30ng/mL)、CD28(30ng/mL),加入经180Gy辐射的健康供者PBMC(1*108)的培养瓶中,刺激第二天,加入IL-(4000U/ml)快速扩增。尿亚硝酸盐定性试验试剂(Griess试剂)