G418又称遗传霉素,新霉素,对细菌、酵母、高等植物、原生生物、哺乳动物细胞具有氨基苷类毒性,对真核细胞进行筛选。G418(G418,G 418,G-418,Geneticin)是一种氨基糖苷类 ,这种氨基糖类的结构和新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似,在分子遗传试验中,是稳定转染常用的抗性筛选试剂。它通过克制转座子Tn601,Tn5的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生东西,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA ,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的表达 ,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。G418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以普遍应用。BMC原代分离步骤:加5倍以上体积的PBS洗2次,每次离心1500rpm,10min。EDTA洗液(10%)
食品检测检测试剂盒样品收集、处理及保存方法:血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒液的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或血脂高血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。HT Media Supplement(50×)检测试剂盒保存:部分试剂保存于-20℃,部分试剂保存于2-8℃,详细以标签上的标明为准。
从试剂瓶取用试剂,用左手持量筒(或试管),并用大姆指指示所需体积刻度处。右手持试剂瓶(注意:试剂标签应向手心避免试剂沾污标签),慢慢将液体注入量筒到所指刻度。读取刻度时,视线应与液体凹面的低处保持水平。倒完后,应将试剂瓶口在容器壁上靠一下,再将瓶子竖直,以免试剂流至瓶的外壁。如果是平顶塞子,取出后应倒置桌上,如瓶塞顶不是扁平的,可用食指和中指(或中指和无名指)医学教育|网搜集整理将瓶塞夹住(或放在洁净的表面皿上),切不可将它横置桌上。取用试剂后应立即盖上原来的瓶塞,把试剂瓶放回原处,并使试剂标签朝外,应根据所需用量取用试剂,不必多取,如不慎取出了过多的试剂,只能弃去,不得倒回或放回原瓶。以免沾污试剂。
缓冲溶液作用原理和pH值:当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时,有阻碍溶液pH变化的作用,称为缓冲作用,这样的溶液叫做缓冲溶液。弱酸及其盐的混合溶液(如HAc与NaAc),弱碱及其盐的混合溶液(如NH3·H2O与NH4Cl)等都是缓冲溶液。由弱酸HA及其盐NaA所组成的缓冲溶液对酸的缓冲作用,是由于溶液中存在足够量的碱A-的缘故。当向这种溶液中加入一定量的强酸时,H 离子基本上被A-离子消耗:所以溶液的pH值几乎不变;当加入一定量强碱时,溶液中存在的弱酸HA消耗OH-离子而阻碍pH的变化。当加入一定量强碱时,溶液中存在的弱酸HA消耗OH-离子而阻碍pH的变化。
液体固体试剂正确取用试剂的方法过程:液体试剂的取用方法试剂瓶取用试剂,用左手持量筒(或试管),并用大姆指指示所需体积刻度处。右手持试剂瓶(注意:试剂标签应向手心避免试剂沾污标签),慢慢将液体注入量筒到所指刻度。读取刻度时,视线应与液体凹面的低处保持水平倒完后,应将试剂瓶口在容器壁上靠一下,再将瓶子竖直医学|教育网搜集整理,以免试剂流至瓶的外壁。如果是平顶塞子,取出后应倒置桌上,如瓶塞顶不是扁平的,可用食指和中指(或中指和无名指)将瓶塞夹住(或放在洁净的表面皿上),切不可将它横置桌上。检测试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)。碘化钾淀粉指示剂(0.5%)
早期的化学试剂只是指“化学分析和化学试验中为测定物质的组分或组成而使用的纯粹化学药品”。EDTA洗液(10%)
利福平助溶剂:性状:白色或类白色粉末,无刺激气味,易溶于水。主要成分:医药级药物赋形剂。成分特性:赋形剂性质稳定,与主药无配伍禁忌,不产生副作用,不影响疗效,在常温下不易变形、干裂、霉变、结块、对人体无害、无生理作用,不与主药产生拮抗作用,不影响主药的含量测定等。作用机理:浅化学机理助溶,根据药物分子结构贴合相应的亲水基团,从而达到助溶目的。使用方法:利福平与助溶剂按7:3比例添加混合均匀,即得70%水溶利福平,混合后粉碎一遍效果更佳。(如需加工10-30%水溶利福平,用加工好的70%水溶剂福平加兽药辅料稀释即可。)标准:企业标准,混合后水溶利福平基本无白点,加入水中,溶解迅速至澄清, 溶解度4000PPM以上, 溶液中性弱碱, PH值7左右。注意事项:加工成水溶性原料后,应在干燥密封处保存,避免氧化!!!EDTA洗液(10%)