主要试剂配制:(1)PBS:PBS粉剂每袋加ddH2O定容至1000mL,调pH7.2,高压灭菌,4℃保存备用。(2)RPIM-1640培养基:临用前根据需要加15%胎牛血清,较后按1%体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素),使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U/mL和100 U/mL,置于4℃冰箱保存。(3)台盼蓝染液:称取4g台盼蓝,于研钵中用少量双蒸水研磨,加双蒸水至100mL,1500rpm离心15min,吸取上层液,即为4%水溶液。用前,用1.8%氯化钠溶液稀释1倍,即为2%台盼蓝染液。在缓冲溶液中加入少量强酸或强碱,其溶液pH值变化不大。线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)
试剂盒的原理:根底是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶符号。结合在固相载体外表的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶符号的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体外表的抗原或抗体起反响。用洗刷的办法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分隔。再参加酶符号的抗原或抗体,也通过反响而结合在固相载体上。此刻固相上的酶量与标本中受检物质的量呈必定的份额。参加酶反响的底物后,底物被酶催化成为有色产品,产品的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。JYBL-Ⅳ脱钙液试剂的稳定性对准确度非常重要。
Tricine加样缓冲液(2×)使用说明书 说明书:①试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。②实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。③使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。④加入试剂的顺序,以保证所有反应板孔温育的时间一样。⑤按说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。Tricine加样缓冲液(2×):产品规格:5ml。分类:电泳蛋白。储存条件:—20℃,12个月。用途:又称三羟甲基甘氨酸加样缓冲液,Tris-tricine缓冲系统的PAGE电泳。注意事项:主要由Tris-HCl、DTT、G-250等组成。
为了避免溶液洒出,同时不要让溶液在刻度线上面沿瓶壁流下,用玻璃棒引流。为保证溶质尽可能全部转移到容量瓶中,应该用蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒二、三次,并将每次洗涤后的溶液都注入到容量瓶中。轻轻振荡容量瓶,使溶液充分混合。(用玻璃棒引流)定容:加水到接近刻度2-3厘米时,改用胶头滴管加蒸馏水到刻度。定容时要注意溶液凹液面的低处和刻度线相切,眼睛视线与刻度线呈水平,不能俯视或仰视,否则都会造成误差。 摇匀:定容后的溶液浓度不均匀,要把容量瓶瓶塞塞紧,用食指顶住瓶塞,用另一只手的手指托住瓶底,把容量瓶倒转和摇动多次,使溶液混合均匀。检测试剂盒标本的重复冻融所发作的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子发作损坏效果。
说明检测试剂盒的具体规则:汲取液体时要选用量程和需要量挨近的微量加样器吸,削减误差。液体全部参加酶标孔后,将酶标板放在桌子上平行轻轻摇晃30s,使液体充沛混合均匀,也使其得到充沛的反响。孵育时要使盖板膜封好酶标板,避免水分蒸发,以防曲线不成线性。实验前的30min将试剂盒中的所有试剂从冰箱取出,检测试剂盒使试剂盒中的所有试剂与提取好的样品溶液的温度相同,酶标板只需取出所需量。因为底物显色剂对光及其灵敏,因而要避光保存。手艺洗板时每次参加洗涤液后。应静置15~30s,不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中,避免穿插污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。外用液体试剂系指药物与适宜的溶剂或分散介质制成的。乙酸消化液(清洗液)
用无菌吸管吸掉上层血浆和血小板,不要碰到单个核细胞层。线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)
试剂空白吸光度是反映试剂质量的指标之一,但不能反映试剂质量的全部。试剂成份、纯度、用量及稳定性,才是保证试剂质量的关键所在。目前市售的一些试剂具有抗干扰作用,主要是通过加入抗干扰物质或使用新的色素原以避免内源性物质的干扰。但值得注意的是:一些试验项目在消除内源性物质干扰的同时,会带来样品含量真实性的变化。 线性范围变窄 现象:高值测不高。原因:生产试剂时有效成分投料量不足;试剂成份稳定性较差。灵敏度变低现象:酶促反应速度曲线斜率下降,测定结果有严重系统误差。原因:试剂底物浓度不足。线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)