细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染技术已成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越***。那么,罗氏都有哪些转染试剂,其优势都有哪些?图1.细胞转染过程X-tremeGENE9DNA转染试剂简介:X-tremeGENE9DNA转染试剂是脂质和其它成分混合而得的一类多组份试剂,溶于80%乙醇中,经0.2μm滤膜过滤,然后封装于玻璃小瓶中,适用于细胞分析的多种实验。通过缓冲液的作用以及脂质与内体膜融合,增大内体的内部渗透压。合肥开封细胞高效转染试剂
如何高效率实现细胞转染:DNA转染导入细胞胞浆内的DNA不能穿过细胞核的核膜("核屏障")。在细胞有丝分裂过程中核膜溶解,DNA进入细胞核才有可能。为此,细胞处于分裂期对DNA转染是至关重要的,并且处于分裂期的细胞比例必须尽可能大才能实现高效转染。DNA转染机制示意图如下所示:转染RNA(siRNA/miRNA/mRNA)对于RNA转染是没有"核屏障"的,因为RNA不需要进入细胞核发挥其生物学效应,因此细胞分裂对它没有影响。转染试剂的选择理想的转染试剂选择可以使您的实验如虎添翼!真核细胞的先天免疫系统,使它们能够检测外来物质如脂多糖、细菌或细菌核酸和蛋白质,并克制潜在病原体的入侵。此外,细胞通过信使分子向临近细胞传递发现有害物质的信号。因此,这些临近细胞甚至无需接触病原体即可采取防御方式。这种细胞先天免疫系统也是转染成功的一个障碍。石家庄正规细胞高效转染试剂价格到时后,根据细胞种类决定是否移除混合液。
细胞转染操作方法:转染,是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法,有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种细菌介导的转染技术。理想细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。细菌介导的转染技术,是目前转染效率较高的方法,同时具有细胞毒性很低的优势。但是,细菌转染方法的准备程序复杂,常常对细胞类型有很强的选择性,在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法,则各有其特点
DNA细胞转染步骤:1.提前现在细胞铺板提前现在将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞密度在60%左右为宜。2.转染过程⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成DNA稀释液。注意:无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。⑵将2μlEntransterTM-H4000用25μl无血清稀释液体稀释,充分混匀,制成EntransterTM-H4000稀释液。室温静置5分钟。⑶将EntransterTM-H4000稀释液分别加入到DNA稀释液中,充分混匀(可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上),室温静置15分钟。转染复合物制备完成。⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上,轻柔混匀。注意:①对本试剂,采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。②完全培养基可加物品。来指示细胞中目标基因是否存在,这样的报告基因一般可以在转染后一两天内检测到。
细胞转染效率低下的几个大坑:1.细胞污染细胞污染也是造成细胞死亡,转染效率低下的一大原因。首先,转染细胞用的质粒必须保证无菌。而现在市场上的一般的质粒提取试剂盒都做不到较全无菌。毛博这里再贡献一个独门绝招:将提完质粒后或者提的较后一步,用75%乙醇沉淀,这样就除菌了。2.质粒不行转染用的质粒首先要保证数量,一般为2μg以上。质粒纯度不够或者含有细菌LPS或其他对细胞有毒害作用的物质,也会影响转染效率。这个时候,就应该对质粒进行纯化和浓缩。脂质体可以和带负电荷的核酸结合后重新形成复合物。唐山细胞高效转染试剂厂家
因为DNA摄入效率和表达水平在不同实验中差异较大,实验必须很小心。合肥开封细胞高效转染试剂
细胞转染实验简介实验步骤:1、细胞传代(1)试验准备:200ul/1mlTip头各一盒(以上物品均需高压灭菌),酒精棉球,废液缸,试管架,微量移液器,记号笔,培养皿,离心管。(2)弃掉培养皿中的培养基,用1ml的PBS溶液洗涤两次。(3)用Tip头加入1mlTrypsin液,消化1分钟(37。C,5%CO2)。用手轻拍培养瓶壁,观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。(4)加入1ml的含血清培养基终止反应。(5)用头多次吹吸,使细胞完全分散开。(6)将培养液装入离心管中,1000rpm离心5min。(7)用培养液重悬细胞,细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。(8)将合适体积完全培养液加入离心管中,混匀细胞后轻轻加入培养皿中,使其均匀分布。(9)将培养皿转入CO2培养箱中培养,第二天转染。合肥开封细胞高效转染试剂
如何高效率实现细胞转染:阳离子脂质体转染试剂脂质转染试剂,以其适用宿主范围广,操作简便,对细胞毒性小,转染效率高受到研究者们的青睐。脂质体(liposome)是一种人工膜,在水相中形成具有双分子层结构的球形封闭囊泡。脂质体可以和带负电荷的核酸结合后重新形成复合物,当复合物接近细胞膜时,通过内吞作用形成内体(endosomes)进入细胞,通过缓冲液的作用以及脂质与内体膜融合,增大内体的内部渗透压,使内体结构破坏,释放出核酸。随后DNA复合物被释放进入细胞核内。对于普通细胞系,一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。利用脂质体转染法较重要的就是防止其毒性,因此脂质体与质粒的比例,细胞密度以及转染的时间长...