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细胞培养注意事项及常见问题解答：1、培养基的选择依细胞种类而定。如果是从别的实验室借来的细胞，较初阶段一定要保持细胞原有的培养条件；特殊种类的细胞，比如内皮细胞，可以借鉴网上培养成功的条件，添加一些特定成分。2、液体培养基的保存条件应是冰箱4度冷藏。小六儿见过有的大实验室细胞量多，一次性购买的培养基瓶数也多，有些人可能觉得-20冰箱保存时间会更久一些。但是经过冷冻后的培养基再溶化时，你会发现培养基的颜色发生变化，颜色变深，这就是培养基的PH值升高了。3、培养基中都含有大量的谷氨酰胺，用来合成细胞生长所需要的核酸和蛋白质。但是谷氨酰胺在溶液中不稳定，保存4周后的培养基需要重新加入谷氨酰胺。所以尽量不要大批量购买培养，也不要一次配太多的培养基。如果培养液的量在5ml以下，可以采用旋转瓶培养。苏州正规原代细胞分离试剂盒厂家批发价

原代细胞体外培养现状：随着研究者们对细胞和分子生物学理解的进展，结合技术改进，科学家们现已成功地将人类原代细胞培养作为体外模型用于用于疾病病理和再生医学研究。原代细胞在体外仍保留其组织特异性特征，因此在培养皿中，可以提供更加有价值的信息。不仅*是二维培养，研究者们现已开始使用3D培养技术，通过原代细胞，体外重现部位中细胞与其微环境的相互作用。随着科学家们对细胞-细胞和细胞-细胞外基质（ECM）相互作用的理解不断增长，对更复杂和真正具有组织替代性的模型系统的需求也在不断增长。石家庄原代细胞分离试剂盒厂家直销只用于某些特定的细菌如猪传染性肠胃炎细菌的培养。

保存条件：-20℃保存，一年有效。其中台盼蓝染色液也可以4℃保存，PMSF(晶体)和PMSF(溶剂)在配制成100mM PMSF溶液前可以室温保存。注意事项：1.试剂盒中的试剂对于不同的实验目的不必全部使用。2.如果不是用于制备线粒体蛋白样品，线粒体分离试剂和线粒体裂解液中不必加入PMSF。3.如果用于制备线粒体蛋白样品，线粒体分离试剂和线粒体裂解液中需添加PMSF。PMSF一定要在线粒体分离试剂或线粒体裂解液加入到样品中前4.2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。5.分离线粒体的所有步骤均需在冰上或4℃进行，所用溶液需冰浴或4℃预冷。6.通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取600g和11,000g，如果希望纯度更高，但对线粒体的得率要求不高，前后两次离心速度可以采用1000g和3500g。

原代细胞培养之分离注意事项：贴壁型原代细胞1)原代培养的分离细胞在初次接触体外环境时，它们之间会互相影响，在这些细胞之间能产生一些促生长的活性物质，使细胞彼此互相促进存活和生长。如果接种的细胞密度过低，细胞之间的促生长作用很小，也很难使细胞适应从体内的组织环境到被分散后进入**生存环境的变化过程。如果接种的细胞密度过大，会导致营养物质供应不足，代谢废物积累较快需要经常换液和传代。2）适当增大原代培养接种的细胞密度，给培养的细胞提供更多的类似于在体内时细胞之间的相互作用，会极大提高原代培养的细胞在体外存活率。待细胞适应体外环境后进行传代培养时再以较低的密度接种和培养。3）尽快使接种的细胞贴壁，是决定培养能否成功的关键。可以在接种后先将培养瓶置培养箱内培养3h到5h，待细胞贴壁后，再补足培养液继续培养。原代细胞作为更接近体内环境的研究模型。

取材的基本要求和注意事项叙述如下： 一、取材的基本要求 （1）取材要注意新鲜和保鲜 新鲜组织易于培养成功，取材时应尽量在 4~6h 内能制作成细胞，尽快入箱培养，若不能即时培养，应 将组织浸泡于培养液内，于 4℃存放。若组织块较大，应在除去表面血块、坏死组织、脂肪和结缔组织后，切碎于培养液内 4℃存放， 但时间不能超过 24h。 对于已切碎的组织或血液、 淋巴组织应加入含 10%二甲基亚砜的培养基， 按细胞冻存方式于液氮中冷冻保存。 （2）取材应严格无菌 所取标本材料应在无菌条件下进行，为了确保无菌，对所取材料若疑有污染的可能，应将所取组织在含高浓。确定一种特定细胞类型在低至无血清培养基中正常生长和功能所需的较低条件。南京重庆原代细胞分离试剂盒

要避免经常翻动和振动，否则组织块不易附着于瓶壁上或附着后也会脱落飘起。苏州正规原代细胞分离试剂盒厂家批发价

原代细胞和传代细胞培养有什么区别：一、定义不同：1、原代培养是指由体内取出组织或细胞进行的开始培养，也叫初代培养。2、传代培养是指需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养的过程。对单层培养而言，80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。二、特点不同：1、原代细胞培养与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。由于培养的细胞刚刚从组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。2、当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一则细胞之间相互接触而发生接触性克制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。苏州正规原代细胞分离试剂盒厂家批发价

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